[发明专利]复合鼠疫疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于人或动物免受鼠疫杆菌感染的免疫预防的鼠疫疫苗， 特别适合于正常人群的免疫预防，也涉及所述疫苗的制备方法。具体而言，所述 疫苗含鼠疫杆菌弱毒菌株的菌体裂解产物与鼠疫杆菌V抗原，可选还包含鼠疫 杆菌F1抗原。

背景技术

鼠疫是一种以蚤类为媒介的人畜共患病，其病原体是鼠疫耶尔森菌(也称为 鼠疫杆菌)。世界上曾经有三次鼠疫大流行，在1348年欧洲爆发的第二次流行中， 欧洲有三成人口死亡。过去的鼠疫大流行中，共有上亿人死于鼠疫。现在人间鼠 疫已不多见，但鼠间鼠疫还很猖獗。世界范围内鼠疫自然疫源地并未缩小，加上 经济差异造成各国卫生条件参差不齐，因此不能排除局部地区，特别是贫困地区 爆发鼠疫的可能性。近年来鼠疫疫情仍时有发生，虽然抗生素能有效治疗腺鼠疫， 但由于肺鼠疫和败血症型鼠疫病情进展迅速，即使使用抗生素死亡率仍很高，可 达50％。此外，鼠疫杆菌还可能被生物恐怖者作为生物战剂之一。可见，鼠疫 仍然是一个关系到公共健康的问题。

传统的鼠疫疫苗有两种。一种是灭活全菌体死疫苗，早在1897年Haffkine 在印度制出了死疫苗。它的缺点是：疫苗价格昂贵；保护期短，每年需加强注射； 副反应高，局部反应发生率为11％～24％，全身反应发生率为4％～6％。另一种 是减毒活疫苗，减毒活疫苗自1908年开始应用，是由鼠疫强毒株分化而来的Pgm- 菌株，在人工培养基中(如刚果红培养基)不能吸收色素，所以为Pgm-。我国 于1954年自前苏联引进EV弱毒株，选用皮下注射，在使用中发现副作用极大。 1960年，改为皮上划痕。EV株不是无毒株，小鼠免疫后致死率可达1％。由于 严重副反应，西方国家认为不能用于大规模接种。我国采用皮上划痕接种，反应 轻微，但不能保证进入体内的菌数，影响疫苗保护效果。由于上述两种传统鼠疫 疫苗存在的缺陷和不足，使得鼠疫新疫苗即鼠疫亚单位疫苗应运而生。这方面的 研究已经很多。Oyston等(1995)首先研究了重组F1抗原，即用产生F1抗原的 AroA鼠伤寒沙门氏菌活菌免疫家兔，免疫的兔血清可以被动保护小鼠免受鼠疫 毒菌的攻击。之后，Leary等(1995)用鼠疫重组菌产生的V抗原免疫小鼠，进行 了鼠疫的保护力试验。而Eyles等(2000)用重组F1和V亚单位制成联合疫苗。 中国专利第96193850.1号也涉及包含鼠疫杆菌V抗原和F1抗原的疫苗，而 WO2005/023205A2及WO2005/047309A2涉及进一步的研究。

此外，目前的鼠疫疫苗大多以铝盐为佐剂。铝盐是唯一广泛用于人类的佐 剂，具有成本低、可大规模生产等优点，但多年的使用表明它有许多不足之处， 如：铝盐佐剂对小分子量的抗原增强免疫应答的效果还不够理想；可引起局部的 刺激性炎症；而且，以铝盐为佐剂的疫苗不能冻干，必须冷藏保存，造成疫苗的 运输困难；铝盐易在体内蓄积，特别是脑部，有可能导致神经系统病变。

传统的鼠疫死疫苗和活疫苗都存在着许多缺点，副反应率高和效果不甚理 想等问题。虽然，通过基因重组技术研究鼠疫基因重组亚单位疫苗在解决安全性 和免疫保护效果方面有所突破，但仍需要开发和研究安全性更高和效果更好的鼠 疫疫苗。

发明内容

本发明提供一种鼠疫疫苗，它包含鼠疫杆菌弱毒菌株的菌体裂解产物与V 抗原。所用鼠疫杆菌菌株为鼠疫杆菌弱毒菌株，可以是国家药品管理当局批准的 皮上划痕用鼠疫活疫苗制造菌株—鼠疫杆菌弱毒EV菌株，但其它鼠疫杆菌弱毒 菌株也同样适用。

优选地，上述疫苗还包含有鼠疫杆菌F1抗原。

上述V或F1抗原可以是分离纯化得到的，但优选由转化有能表达鼠疫杆菌 V或F1抗原的表达载体的重组微生物产生。表达鼠疫杆菌V或F1抗原的重组 微生物宿主也没有特别的限制，优选为大肠杆菌。其中表达的V或F1抗原基因 优选克隆自鼠疫杆菌的强毒株。而且，可以采用现有技术已知的表达V或F1抗 原的重组微生物，也可根据已公开的V或F1抗原的核苷酸序列，而通过常规的 重组技术来制备得到这种重组微生物。这方面可参考已公开的文献，如中国专利 CN1155707C、傅林锋等(微生物学报，2003，Vol.43，No.4；微生物学免疫学进 展，2004，Vol.32，No.3)、黄顺军等(免疫学杂志，2004，Vol.20，No.3)等提供 了V或F1抗原基因的重组表达的详细方法。

本发明的鼠疫疫苗可以制成液体疫苗或冻干制剂。