[发明专利]特异地结合链球菌表面抗原Ⅰ/Ⅱ的双价抗体及其使用方法

说明书

发明背景

龋齿是人类最普遍的传染病。主要的病原体是一组链球菌，总称 为变异链球菌(Balakrishnan等。(2000)8月。Dent.J.45：235-45)。 变异链球菌已被鉴定为这种疾病的主要病原体。与许多其他疾病不同， 龋齿在西方发达国家如同在发展中国家一样流行，因此受到内科和牙 科权威部门以及药物公司的广泛关注。感染开始的第一步是细菌粘附 到合适的受体；一个理想的介入位点。变异链球菌的两组蛋白质代表 了人龋齿疫苗主要的候选蛋白：合成粘性聚糖并使微生物聚集的葡萄 糖基转移酶；以及介导对分泌唾液粘膜粘附的细胞表面纤维蛋白 (Hajishengallis和Michalak(1999)Oral Microbiol.Immunol.14：1-20)。 细菌的粘附素SAI/II是分子量为190kDa的表面显示蛋白质(Russell， 等。(1978)Arch.Oral Biol.23：7-15)，在变异链球菌与牙齿表面 的最初粘附中起重要作用。

特异性识别变异链球菌的SAI/II蛋白和远缘链球菌(Streptococcus sobrinus)(Smith和Lehner(1989)，如上所述)的鼠单克隆抗体 Guy′s 13(Smith和Lehner(1989)Oral Microbiol.Immunol.4：153-8) 已经被成功地用于预防非人类灵长类动物体内变异链球菌的定殖和龋 齿的发展(Lehner，等(1985)Infect.Immun.50：796-9)。在人类临 床试验中抗体也能阻止细菌的定殖(Ma，等。(1990)Infect.Immun. 58：3407-14；Ma，等。(1989)Clin.Exp.Immunol.77：331-7)。然 而，像其他的鼠抗体一样，临床应用中主要的限制可能是人抗鼠抗体 反应(HAMA)，这能够增加清除率并引发过敏性反应(Saleh，等。 (1999)Cancer Immunol.Immunother，32：185-90)。鼠抗体相关的 问题可以通过用他们的人对应物替换鼠的序列而被克服，例如通过嵌 合化(Mountain和Adair(1992)Biotechnol.Genet.Eng.Rev.10：1-142)， CDR移植(Kettleborough，等。(1991)Protein Eng 4：773-83)以及 应用噬菌体显示技术所指导的选择(Beiboer，等。(2000)J.MoI.Biol， 296：833-49)替换。此外，使用抗体片段而不是整个抗体也可以除去 那些可能引起免疫反应的恒定区。

其中的抗SAI/II抗体和片段已公开在美国专利5,518,721； 5,612,031；以及5,854,402和WO 88/06455中。这些公开物教导人们应 用牙膏，嗽口水，口香糖，锭剂或凝胶的形式的抗SAI/II抗体组合物 抗击龋齿。

然而，尽管事实上教导了使用抗SAI/II的抗体抗击龋齿的几种可 能的治疗，但是尚未确认克服了与传统抗体相关的问题而且能够有效 用于治疗龋齿的基因工程化人双价抗体(diabodies)的生产和出现。

发明概述

本发明提供一种分离的双价抗体(双价抗体)，它可以特异性结合链 球菌表面抗原I/II(SAI/II)，其中双价抗体由人重链可变区和人轻链 可变区组成。在一个实施方案中，重链可变区有SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：5，或SEQ ID NO：7的氨基酸序列。在另一实施方案中，轻 链可变区有SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：6，或SEQ ID NO：8的氨基 酸序列。在特殊的实施方案中，双价抗体含有位于重链可变区和轻链 可变区之间的短衔接序列而且是SEQ ID NO：9所代表的序列。

含有编码能够特异性结合链球菌SAI/II的双价抗体核酸序列的载 体和含有而且能够表达其的宿主细胞是本发明进一步的实施方案。

本发明的另一实施方案是预防或治疗与链球菌相关的口腔疾病的 方法。该方法包括施用有效量的能特异性结合链球菌SAI/II的双价抗 体从而使口腔疾病的至少一种体征或症状得以预防或治疗。

本发明还提供了含有能特异性结合链球菌SAI/II的双价抗体的组 合物和试剂盒。

附图说明

图1显示了单克隆抗体Guy13抑制嵌合scFv(mGuy13VH/huVL； A1，A6，A9，B4，C6和G4)与SAI/II的结合。