[发明专利]磷脂酶，编码磷脂酶的核酸以及制备和应用磷脂酶的方法

权利要求书

1.分离的、合成的或重组的核酸，其是编码具有磷脂酶C活性的多肽的核酸， 其中所述核酸序列是：

(a)SEQ ID NO：1；

(b)编码SEQ ID NO：2中所阐明的多肽的核酸；或

(c)编码多肽的核酸，所述多肽如SEQ ID NO：2的38至282位氨基酸所示 且具有N63D、N131S和N134D的氨基酸修饰。

2.权利要求1所述的核酸，其中所述核酸序列是在SEQ ID NO：1中阐明的所 述序列。

3.权利要求1所述的核酸，其中所述核酸序列编码多肽，所述多肽是在SEQ  ID NO：2中所阐明的序列。

4.权利要求1所述的核酸，其中所述磷脂酶活性催化甘油磷酸酯键的水解。

5.表达盒，其具有在权利要求1中所阐述的核酸序列。

6.载体，其具有在权利要求1中所阐述的核酸序列。

7.克隆载体，其具有在权利要求1中所阐述的核酸序列。

8.权利要求7所述的克隆载体，其中所述病毒载体是腺病毒载体、逆转录病 毒载体或者腺相关病毒载体。

9.权利要求7所述的克隆载体，其为细菌人工染色体(BAC)、质粒、细菌 噬菌体P1衍生载体(PAC)、酵母人工染色体(YAC)或者哺乳动物人工染色体 (MAC)。

10.转化的细胞，其具有在权利要求1中所阐述的核酸序列。

11.转化的细胞，其具有在权利要求5中所阐述的表达盒。

12.权利要求11所述的转化的细胞，其中所述细胞是细菌细胞、哺乳动物细 胞、真菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞或者植物细胞。

13.分离的、合成的或重组的多肽，其具有磷脂酶C活性，其中所述多肽是：

(i)SEQ ID NO：2中所阐明的氨基酸序列；(ii)由SEQ ID NO：1中所阐明的 核酸序列编码；或(iii)(i)或(ii)如SEQ ID NO：2的38至282位氨基酸所示且 具有N63D、N131S和N134D的氨基酸修饰的多肽。

14.权利要求13所述的多肽，其中该多肽是在SEQ ID NO：2中所阐明的序列。

15.权利要求13所述的多肽，其中所述磷脂酶C活性催化甘油磷酸酯键的水 解。

16.权利要求13所述的多肽，其中所述多肽具有至少一个糖基化位点。

17.权利要求16所述的多肽，其中所述糖基化是N-连接糖基化。

18.权利要求17所述的多肽，其中所述多肽是在巴斯德毕赤酵母(P.pastoris) 或者粟酒裂殖酵母(S.pombe.)中表达之后被糖基化。

19.蛋白制剂，其具有在权利要求13中阐明的多肽，其中所述蛋白制剂包括 液体、固体或凝胶。

20.固定化多肽，其中所述多肽是权利要求13中所阐明的序列。

21.权利要求20所述的固定化多肽，其中所述多肽固定于细胞、金属、树脂、 聚合物、陶瓷、玻璃、微电极、石墨颗粒、珠子、凝胶、板、阵列或者毛细管。

22.水解、分解或破坏磷脂组合物的方法：

(a)提供权利要求13中所阐明的多肽；

(b)提供具有磷脂的组合物；和

(c)在所述磷脂酶水解、分解或破坏磷脂组合物的条件下，将步骤(a)的 多肽与步骤(b)的组合物接触。

23.权利要求22所述的方法，其中所述组合物是含有磷脂的脂双层或膜。

24.权利要求22所述的方法，其中所述组合物是植物细胞、细菌细胞、酵母 细胞或动物细胞。

25.去污剂组合物，具有权利要求13中阐明的多肽。