[发明专利]凝集性酒精发酵酵母的生产方法及凝集性酒精发酵酵母

说明书

技术领域

本发明涉及凝集性酒精发酵酵母的生产方法及凝集性酒精发酵酵母。

背景技术

采用发酵法的酒精生产使用作为发酵酵母的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中酒精生产性特别高的株(以下称为酒精发酵酵母)、基于称作分批发酵法的方法进行。其中，使用凝集性酵母的反复分批发酵法可以使酒精生产中的作业效率和生产效率提高。

凝集性酵母是指具有各个细胞无性地相互作用形成凝集块而在静置状态的培养基中沉淀到液底的性质(以下，将该性质称为凝集性)的酵母。从自然界获得的凝集性酵母大多酒精生成能力不足，难以作为工业用酒精生产中的酵母实用化。因此，本发明人制成了在非凝集性酒精发酵酵母396-9-6V株(工业技术院微生物工业技术研究所(现产业技术综合研究所专利生物保藏中心；日本茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6(邮政编码305-8566))；保藏编号：FERMP-12804)中导入了凝集性基因FL01的自身克隆株FSC27株(保藏日：1997年1月7日；保藏编号：FERM P-16023)(专利文献1)。

专利文献1：日本专利第3040959号说明书

发明的揭示

FSC27株的生成乙醇浓度与亲株396-9-6V株同等，但存在发酵速度比396-9-6V株慢的问题。该问题是由于在URA3基因位点导入了FL01的FCS27株呈尿嘧啶需要性。通过以添加适量尿嘧啶的培养基培养FSC27株，虽然发酵速度与396-9-6V株同等，但该方法不实用。

因此，本发明的目的在于提供在不含尿嘧啶的培养基中显示出充分的乙醇生成能力和发酵速度的凝集性酒精发酵酵母。

为了实现上述目的，本发明提供非尿嘧啶需要性的凝集性酒精发酵酵母的生产方法，所述方法具备仅在存在于酿酒酵母FSC27株的染色体上的2个LEU2基因位点中的1个导入来自于酿酒酵母的URA3基因的工序。通过在LEU2基因位点上导入URA3基因，可以在维持高酒精生成能力的状态下使酵母转化为非尿嘧啶需要性。

本发明还提供仅在存在于酿酒酵母FSC27株的染色体上的2个LEU2基因位点中的1个导入了来自于酿酒酵母的URA3基因的非尿嘧啶需要性的凝集性酒精发酵酵母。在这里，凝集性酒精发酵酵母较好是酿酒酵母FSCU-L18株(产业技术综合研究所专利生物保藏中心；保藏日：2004年5月20日；保藏编号：FERMP-20055)。在LEU2基因位点上导入了URA3基因的酵母兼具高酒精生成能力和非尿嘧啶需要性。特别是FSCU-L18株显示出高酒精生成能力，因此适合作为工业用酒精生产中的酵母。

如果采用本发明，则可以提供具有比FSC27株更好的酒精生成能力和发酵速度的非尿嘧啶需要性的凝集性酒精酵母。

附图的简单说明

图1为双融合PCR的简图。

图2为表示向LEU2基因位点导入URA3的策略的图。

图3为表示396-9-6V株的Southern分析结果的图。泳道1：YRpGL10/BamH I，泳道2：EcoR V，泳道3：EcoR I，泳道4：HindIII，泳道5：BamH I，泳道6：Pst I。

图4为FSCU-L株的Southern分析结果的图。(a)表示使用URA3ORF作为探针时的结果，(b)表示使用LEU2 ORF作为探针时的结果，(c)表示使用pBR332/HindIII作为探针时的结果。泳道M：YRpGL10，泳道1：FSC27株，泳道2：FSCU-L18株，泳道3：FSCU-L20株，泳道4：FSCU-L21株。

图5为表示FSCU-L株的烧瓶发酵试验中的二氧化碳产生量的图。

图6为表示使用FSCU-L18株的反复分批发酵中的二氧化碳产生量的图。

图7为表示使用FSC27株的反复分批发酵中的二氧化碳产生量的图。

图8为表示使用FSCU-L18株和FSC27株的反复分批发酵中的发酵所需时间的图。

实施发明的最佳方式

以下，对本发明进行详细说明。

首先，对本发明的非尿嘧啶需要性的凝集性酒精发酵酵母的生产方法进行说明。本发明的非尿嘧啶需要性的凝集性酒精发酵酵母的生产方法具备仅在存在于酿酒酵母FSC27株的染色体上的2个LEU2基因位点中的1个导入来自于酿酒酵母的URA3基因的工序。