[发明专利]适体药物化学

权利要求书

1.鉴别被取代的单链适体的方法，包括下列步骤：

a)用硫代磷酸或二硫代磷酸取代单链适体内核苷酸内连 接部位上的磷酸；

b)分析被取代的单链适体对靶点的亲合力；和

c)鉴别出相对于起始适体，对靶点具有更高亲合力的单链 适体，其中起始适体除了其无硫代磷酸取代之外同源于被修 饰的单链适体。

2.根据权利要求1所述的方法，其中取代步骤进一步包括通过 化学合成在核苷酸内连接部位上加入硫代磷酸取代。

3.根据权利要求2所述的方法，其中取代步骤不包括在单链适 体的3′或5′末端处的两个核苷酸之间的核苷内连接处的硫代 磷酸取代。

4.根据权利要求2所述的方法，其中取代步骤包括在单链适体 内加入单一硫代磷酸取代。

5.根据权利要求4所述的方法，其中被取代单链适体包括的靶 点结合亲合力比起始适体的结合亲合力至少高两倍。

6.由权利要求5所述的方法鉴别的被取代单链适体。

7.根据权利要求4所述的方法，进一步包括向被取代单链适体 中加入一种附加取代而导致产生二次取代单链适体。

8.根据权利要求7所述的方法，进一步包括分析二次取代单链 适体对靶点亲合力并鉴别该二次取代单链适体具有与起始未 取代单链适体的亲合力相等或更高的亲合力。

9.根据权利要求7所述的方法，进一步包括分析二次取代单链 适体对靶点的亲合力并鉴别该二次取代单链适体具有与硫代 磷酸取代单链适体的亲合力相等或更高的亲合力。

10.由权利要求9所述的方法鉴别的二次取代单链适体。

11.根据权利要求7所述的方法，其中附加取代为附加的硫代磷 酸取代，该取代发生在不同于首个硫代磷酸取代位点的磷酸 位点处。

12.根据权利要求7所述的方法，其中附加的取代选自：在碱基 位点取代一种被修饰核苷酸、在糖基位点取代一种被修饰核 苷酸、和在磷酸位点取代一种被修饰核苷酸。

13.根据权利要求12所述的方法，其中附加的取代选自：在磷酸 位点处的二硫代磷酸取代、肌苷取代另一种核苷酸；2′-脱氧 二氢尿嘧啶核苷取代尿嘧啶核苷，2′-脱氧-5-甲基核苷酸取代 另一种核苷酸，2′-脱氧核苷酸取代2′-OMe核苷酸，2′-OMe 核苷酸取代2′-脱氧核苷酸，和2-氨基嘌呤取代一种嘌呤。

14.根据权利要求13所述的方法，其中附加的取代选自：2′-脱氧 肌苷或2′-OMe肌苷取代另一种核苷酸、2′-脱氧二氢尿嘧啶核 苷取代尿嘧啶核苷，2′-脱氧-5-甲基胞嘧啶取代胞嘧啶，和一 种2′-脱氧核苷酸取代2′-OMe核苷酸。

15.鉴别被取代适体的方法，其包括下列步骤：

a)向起始适体中加入一种取代物，其中该取代选自由肌苷 取代另一种核苷，2′-脱氧二氢尿嘧啶核苷取代尿嘧啶核苷、2 ′-脱氧-5-甲基胞嘧啶取代胞嘧啶，2-氨基嘌呤取代嘌呤和2′- 脱氧核苷酸取代2′-OMe核苷酸；

b)分析被取代适体对靶点的亲合力；和

c)鉴别相对于起始适体对靶点亲合力，对靶点具有增强的 亲合力的被取代适体，其中，除了其无取代核苷酸之外，该 起始适体与被取代适体同源。

16.根据权利要求15所述的方法，其中加入步骤进一步包括通过 化学合成向起始适体中加入取代物。

17.根据权利要求16所述的方法，其中鉴别出的取代适体是单链 的。

18.根据权利要求15所述的方法，其中方法进一步包括向被取代 适体中加入另外取代物的步骤，其中另外的取代物与第一取 代的类型不同，从而产生二次取代适体。