[发明专利]转基因玉米种子中增强的玉米醇溶蛋白减少

权利要求书

1.用于抑制多个玉米醇溶蛋白靶基因的重组DNA构建体，其以5′至3′方向包含：启动子元件，其与来自多个玉米醇溶蛋白靶基因的多个反义方向DNA元件操作性连接；反义方向DNA元件，其以5′至3′方向命名为元件1、元件2；和来自多个玉米醇溶蛋白靶基因的多个有义方向DNA元件，其以5′至3′方向命名为元件3、元件4；其中反义方向DNA元件2在其3′端至少有一部分序列与其自身或与有义方向DNA元件3不互补，并且其中由有义方向DNA元件转录的有义方向RNA与由反义方向DNA元件转录的反义方向RNA元件的5′最末端互补。

2.权利要求1中所述的重组DNA构建体，其中反义方向DNA元件1和2来自两个不同的待抑制靶基因，有义方向DNA元件3和4自两个不同的待抑制靶基因。

3.权利要求1中所述的重组DNA构建体，其中反义方向DNA元件1来自待抑制的19kDα-玉米醇溶蛋白靶基因，反义方向DNA元件2来自待抑制的22kDα-玉米醇溶蛋白靶基因，有义方向DNA元件3来自待抑制的22kDα-玉米醇溶蛋白靶基因，并且比反义方向DNA元件2短而且只与元件2的5’末端互补，有义方向DNA元件4来自待抑制的19kDα-玉米醇溶蛋白靶基因而且与元件15’末端的至少一部分序列互补。

4.权利要求1中所述的重组DNA构建体，其中多于1个玉米醇溶蛋白靶基因选自19kD和22kDα-玉米醇溶蛋白、16kD和27kDγ-玉米醇溶蛋白、10kDδ-玉米醇溶蛋白和15kDβ-玉米醇溶蛋白。

5.用于抑制多于1个玉米醇溶蛋白靶基因的重组DNA构建体，其以5′至3′方向包含：启动子元件，其与来自多于1个玉米醇溶蛋白靶基因的多于1个反义方向DNA元件操作性连接；反义方向DNA元件，其以5′至3′方向命名为元件1、元件2；和来自至少一个玉米醇溶蛋白靶基因的至少一个反义方向DNA元件，命名为元件3；其中反义方向DNA元件2在其3′端至少有一部分序列与其自身或与有义方向DNA元件3不互补，并且由有义方向DNA元件转录的有义方向RNA与由反义方向DNA元件转录的反义方向RNA的5′最末端互补。

6.权利要求5中所述的重组DNA构建体，其中反义方向DNA元件1和2来自两个待抑制靶基因，有义方向DNA元件3来自待抑制靶基因。

7.权利要求5中所述的重组DNA构建体，其中反义方向DNA元件1来自待抑制的19kDα-玉米醇溶蛋白靶基因，反义方向DNA元件2来自待抑制的22kDα-玉米醇溶蛋白靶基因，有义方向DNA元件3来自待抑制的19kDα-玉米醇溶蛋白靶基因。

8.权利要求5中所述的重组DNA构建体，其中多于1个玉米醇溶蛋白靶基因选自19kD和22kDα-玉米醇溶蛋白、16kD和27kDγ-玉米醇溶蛋白、10kDδ-玉米醇溶蛋白和15kDβ-玉米醇溶蛋白，其中至少1个玉米醇溶蛋白靶基因选自19kD和22kDα-玉米醇溶蛋白、16kD和27kDγ-玉米醇溶蛋白、10kDδ-玉米醇溶蛋白和15kDβ-玉米醇溶蛋白。

9.具有增强的赖氨酸、增强的油脂和增强的色氨酸中至少一种的玉米种子的制备方法，包括以下步骤：

a)用用于抑制多于1个玉米醇溶蛋白靶基因的权利要求1或权利要求4的重组DNA构建体转化植物细胞；和

b)将植物细胞再生成为可育的转基因植株，其中该植株在其基因组中包含该构建体；和

c)从植株收获种子，其中该种子相对于未用该构建体转化的同一品种的种子而言，具有增强的赖氨酸、增强的油脂和增强的色氨酸中的至少一种。

10.具有增强的赖氨酸、增强的油脂和增强的色氨酸中至少一种的玉米种子的制备方法，包括以下步骤：

d)用用于抑制多于1个玉米醇溶蛋白靶基因的权利要求5或权利要求8的重组DNA构建体转化植物细胞；和

e)将植物细胞再生成为可育的转基因植株，其中该植株在其基因组中包含该构建体；和

f)从植株收获种子，其中该种子相对于未用该构建体转化的同一品种的种子而言，具有增强的赖氨酸、增强的油脂和增强的色氨酸中的至少一种。

11.转基因植物，其在基因组中含有用于抑制多于1个玉米醇溶蛋白靶基因的权利要求1或权利要求4的DNA构建体；