[发明专利]改良的腺病毒载体及其应用

说明书

发明领域

本发明涉及医药领域、特别涉及通过使用在疫苗组合物中包含治疗性核酸的重组嵌合腺病毒载体而进行治疗和预防的领域。

发明背景

重组腺病毒载体广泛用于基因治疗和疫苗。迄今为止，已经鉴别了51种不同的腺病毒血清型。对亚群C腺病毒的应用如基因治疗已经进行了最深入的研究，尤其是血清型2和5(Ad2和Ad5)在本领域广泛应用。重组Ad5用于多种不同目的，包括免疫接种。重要的是，基于Ad5载体的疫苗已经示出在多种动物模型中引起强保护性免疫应答。此外，正在进行对HIV免疫接种的大规模临床试验，其中使用基于Ad5的重组载体(WO 01/02607；WO 02/22080；Shiver et al.2002；Letvin et al.2002；Shiver and Emini.2004)。然而，基于重组Ad5载体的HIV及其它病原体的疫苗的应用很可能明显受到人群中Ad5特异性中和抗体(NAb)的高血清阳性率的限制。在小鼠和恒河猴中的研究已经显示出抗Ad5免疫性的存在显著抑制基于Ad5的疫苗的免疫原性。来自1期临床试验的早期数据显示这种问题也可能发生在人体中(Shiver 2004)。

一种有希望绕开先前感染了最常见的人腺病毒(如Ad5)的个体中预先存在的免疫性的存在的策略包括从未遭遇这种预先存在的免疫性的腺病毒血清型开发重组载体。经鉴别特别有用的人腺病毒载体是基于血清型11、26、34、35、48、49和50，如WO 00/70071、WO 02/40665和WO 2004/037294所述(也见于Vogels et al.2003所述)。其它研究人员已经发现腺病毒24(Ad24)也是特别令人感兴趣的，因为已表明其是罕见的血清型(WO 2004/083418)。

一种相似的策略基于使用猿猴腺病毒，因为这些腺病毒典型地不感染人体。它们在人体样品中呈现低血清阳性率。然而，它们也可用于人体，因为这些病毒可在体外感染人体(WO 03/000283；WO2004/037189)。

已经示出基于腺病毒血清型35(Ad35)载体的疫苗可以引起不被抗Ad5免疫性所明显抑制的强细胞免疫应答(Barouch et al.2004；Vogels et al.2003)。相似地，已经示出黑猩猩腺病毒引起受抗Ad5免疫性影响最低的免疫应答(Farina et al.2001；Pinto et al.2003)。近年来证实中和抗体(NAb)和CD8⁺T淋巴细胞应答均有助于抗Ad5免疫性，而Ad5特异性NAb看起来发挥主要作用(Sumida et al.2004)。尽管这种进展看起来是非常有用的方案，但在没有预先存在的Ad5免疫性的研究中表明基于Ad35载体的疫苗在小鼠中的免疫原性低于基于Ad5载体的疫苗(Barouch et al.2004)。

显然，本领域需要另外的腺病毒载体，其在宿主中不遭遇预先存在的免疫性，但仍然是免疫原性的并且能诱导针对由插入到载体所携带的核酸中的异源核酸编码的蛋白质的强免疫应答。

附图简述

图1(A)示出来自美国、海地、博茨瓦纳、赞比亚和南非的样品中Ad5、AdI1和Ad35的血清阳性率百分比；(B)示出来自美国和来自非洲的样品中抗Ad5、AdI1和Ad35的中和抗体效价。图1C示出这些样品中抗Ad5、Ad5f35、Ad5f35p35、Ad35f5和Ad35的中和抗体效价。

图2(A)示出编码Ad35k5纤维蛋白(fiber protein)的核酸序列(SEQ ID NO：1；下划线示出编码Ad5纤维knob的部分)；(B)示出Ad35k5纤维蛋白的氨基酸序列(SEQ ID NO：2；下划线处代表Ad5纤维knob的部分)；(C)示出编码Ad35f5纤维蛋白的核酸序列(SEQ IDNO：4；下划线处示出编码保留的Ad35纤维片段的部分，而BsiWI克隆位点以小写字母表示)；(D)示出Ad35f5纤维蛋白的氨基酸序列(SEQ ID NO：5；下划线处代表保留的Ad35纤维片段部分)；(E)示出编码Ad35k2 6纤维蛋白的核酸序列(SEQ ID NO：80；下划线处示出编码Ad26纤维knob的部分)；(F)示出Ad35k26纤维蛋白的氨基酸序列(SEQ ID NO：81；下划线处代表Ad26纤维knob部分)；(G)示出编码Ad35k49纤维蛋白的核酸序列(SEQ ID NO：82；下划线处示出编码Ad49纤维knob的部分)；(H)示出Ad35k49纤维蛋白的氨基酸序列(SEQ ID NO：83；下划线处示出Ad49纤维knob部分)。