[发明专利]检测及定量表示多个亚细胞成分的方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2004年9月22日提出的、序号为60/612,067的美国临时专利申请的权益，在与本发明所公开内容不相违背的情况下，通过引用将其全部公开内容并入本文中。

技术领域

本发明涉及一种使用免疫着色和荧光示踪原位杂交技术来检测以及定量表示细胞的多个亚细胞成分的方法。具体地讲，免疫着色与原位杂交的组合允许对细胞中的亚细胞成分的检测，例如对母体血液样本中的胎儿血红蛋白的检测。该方法可用于遗传性疾病的产前和/或胚胎植入前的诊断。

背景技术

存在多种用于对细胞及其成分进行着色和分析的技术。同时应用多种这样的技术的能力非常有益于遗传性疾病诊断中对试样的详细研究，这一能力已引起人们特别的关注。然而，现有技术的组合并不具有任何优于仅采用单一技术的优势。具体地说，例如同时把免疫着色和荧光原位杂交(FISH)分析应用于一个生物试样的能力提供了同时获得例如有关同一细胞的特定蛋白质与核酸成分的定量数据的潜力。然而，传统的或标准的免疫着色和FISH协议互相排斥。成功的FISH分析所需的严酷的条件通常与明显可识别抗原的保持力不相容，或者与用于对细胞成分进行适当检测的基于稳定抗体的信号的持续性不相容。因此，在使用以可视化与定量技术的确定遗传目标的遗传疾病的诊断方面，需要开发更好的技术。

发明内容

提供了一种用于为免疫着色和原位杂交分析准备生物试样的单一连续的方法。

在一个实施例中，提供了一种用于标识细胞中的多个细胞成分的方法，该方法包括：

使细胞样本与至少一种抗体发生反应，其中，每一抗体结合于一种特定的细胞成分，并且生成唯一的荧光信号；

使用一个或多个核酸探针通过原位杂交处置所述细胞样本，其中，把每个核酸探针被构造为与所述细胞中的一个目标核酸序列杂交，并且生成唯一的荧光信号；

生成经过所述反应和处置的细胞样本的一个或多个图像；以及

在所述图像中检测和分析与所述抗体和所述核酸探针相对应的荧光信号。

附图说明

在各附图中，其中相同的标号表示相同的图元：

图1为一个流程图，概要性地描述了本发明的一个实施例的方法；

图2为用于本发明的一个方面的一个实施例的分析系统的方框图；

图3为旨在检测第一信号的阶段I的流程图；

图4A和4B共同为旨在检测第一信号的阶段II的流程图；

图5为检测第二信号的流程图；

图6为使用连续涂片技术、说明本发明的一个实施例的一个装置的一种变体的示意性表示；

图7为用于本发明的一个方面的一个实施例的分析与试剂配制系统的方框图；

图8概要性地描述了本发明的一个实施例，其中使用了多物镜显微镜检查系统；

图9为一种图像“合成”方法；

图10为本发明的一个实施例的校准步骤的流程图；

图11为本发明的一个实施例的预处理步骤的流程图；

图12A和12B为本发明的一个实施例的主处理步骤的流程图；

图13为采用例子1中所描述的、在细胞中通过免疫着色和使用FISH的X与Y染色体识别胎儿血红蛋白的本发明的方法所准备的组合式细胞免疫着色和FISH分析的显微照片。

具体实施方式

在此处所描述的实施例中，提供了一种用于检测和定量表示细胞样本中的细胞的亚细胞成分的方法。可以把该方法应用于包含细胞的多种生物样本，例如血液样本，特别是用于母体血液中遗传性疾病的诊断。

在一个实施例中，所述方法包括产生荧光信号，该荧光信号是通过免疫着色一个或多个抗体生成的，其中对于每一所使用的抗体来说，信号是唯一的，并且持续到用于荧光原位杂交(FISH)分析的细胞样本的接下来的后续处理。在一个实施例中，所述方法包括为所采用的FISH探针选择一个所希望的或唯一的荧光团，从而允许所产生的所有荧光信号的离散的可视化以及定量表示，荧光免疫组织化学信号和FISH信号都是从细胞样本发荧光的。