[发明专利]治疗皮肤情况，失调或疾病的胚胎皮肤细胞蛋白组合物及其制备和使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及对患有皮肤情况，失调或疾病的病人进行治疗的方法和组合物。该组合物包括来源于经细胞裂解的胚胎皮肤细胞的胚胎皮肤细胞蛋白。

背景技术

在妊娠的特定阶段，胚胎皮肤受伤之后的恢复无伤疤形成或伤疤形成极小(也称为无伤疤修复或无伤疤恢复)(Dang C等，Clin Plast Surg 2003：30，13-23)，其显示了在妊娠的特定时期胚胎皮肤细胞应答调节的最佳(平衡)协调(调整)。然而，新生儿，儿童和成人皮肤(对应于非胚胎皮肤)，在受伤后的恢复带有伤疤形成，这表明与胚胎皮肤相比，非-胚胎皮肤的细胞应答调节的最佳性或平衡性较差。

在大型动物和人类中，受伤后的无伤疤修复发生在妊娠的前三分之一时期。在此阶段后，胚胎皮肤受伤后将从无伤疤修复转变为伤疤修复形式。在皮肤中，胎儿的无伤疤修复以带有正常附属物(发囊，汗腺，分泌腺)的真皮组织的再生为特征。无伤疤修复被认为是，至少部分地，炎症的相对缺失的结果，其相应于受伤后的平衡(最佳)前-和抗-炎症应答。

无伤疤修复的能力似乎是胚胎皮肤的特性，并可能是许多调节蛋白包括细胞因子的协调交互作用的结果。这将在下文描述。

无伤疤胚胎修复带有极小的炎症，而在胎儿修复期间伤疤的形成与急性炎症渗透相关联(G.P.Yang等.Wound Rep Reg 2003；11：411-418)。此外，在正常的无伤疤-修复中引入炎症引起增加胶原质沉积和伤疤形成的结果。这意味在伤疤形成过程中炎症具有重要的功能。当免疫系统产生并且应答炎症反应增加时，伤疤开始形成于修复位置。伤疤纤维原细胞的细胞外基质(ECM)的合成和改变可能是修复后真皮构建的主要决定因素。伤疤和无伤疤形成中胶原质构建之间的区别可以部分地由成人和胚胎成纤维细胞间表型的不同而解释。

胚胎和成人的成纤维细胞在胶原质，透明质酸(HA)，和其它ECM成分的合成速率方面有所不同。在体外，相对于成人，胚胎成纤维细胞合成更多的III和IV型胶原质。胚胎成纤维细胞可以同时扩增(生长)和合成胶原质。胚胎成纤维细胞相比于成人成纤维细胞，其具有更强的迁移进入胶原凝胶的能力。增加的细胞密度减少了成人中HA的生成，但对胚胎成纤维细胞HA合成无影响。

转化生长因子(TGF)异构体TGF-β1和TGF-β2(两种异构体都为生长因子；生长因子属于细胞因子蛋白家族)具有前纤维化功能(引起纤维化)并促进伤疤形成。它们的表达在正常的创伤修复中增加，并且对成人伤疤施用外源的这种生长因子可增加胶原，蛋白聚糖，和炎症细胞的聚集。TGF-β1也可以减少基质金属蛋白酶并增加基质金属蛋白酶表达的内源性抑制物，其可促进胶原聚集和伤疤形成。此外，在成年大鼠创伤模型中施用TGF-β1和TGF-β2的中和抗体可以减少伤疤形成。据报道施用纤维调节素，一种TGF-β调节物，也可减少出生后的伤疤形成。

此外，已经发现，一定比例TGF-β异构体组成的成分，而非特定数量的任何一种异构体，决定了创伤修复的产生。在无伤疤胚胎创伤中，TGF-β3(TGF-β异构体)的表达增加而TGF-β1的表达无变化。相反地，在伤痕性胚胎创伤中TGF-β1的表达增加而TGF-β3的表达减少。在成年大鼠创伤模型中施用外源性TGF-β3可减少伤疤形成。这些数据表明TGF-β3与TGF-β1的比例可决定在受伤后皮肤的构建是复原性或形成伤疤。

白介素(属于细胞因子蛋白家族)调节炎症细胞的趋向性和活性。白介素-6(IL-6)刺激单核细胞的趋化和巨噬细胞的活性，而白介素-8(IL-8)引发嗜中性粒细胞并刺激新血管形成。创伤刺激了IL-6和IL-8的快速增长，其在成人中持续存在而在胎儿中迅速消失。血小板衍生的生长因子(PDGF，属于细胞因子蛋白家族的生长因子)引发成人纤维原细胞中IL-6的生成。依次，胚胎创伤中增加的IL-6将形成早期伤疤。相比于成人，胎儿纤维原细胞IL-6和IL-8的表达低于基线并且受PDGF刺激后其表达也较低。通过减少IL-6和IL-8的生成，白介素-10(IL-10)具有一种抗-发炎作用。例如，据显示在成熟大鼠中对创伤施用过量表达IL-10的腺病毒载体可减少发炎并产生无创伤修复。