[发明专利]细胞培养用人血清

说明书

技术领域

本发明涉及细胞培养用人血清，更详细地说是涉及大量含有细胞生长因子的细胞培养用人血清。

本申请要求2004年11月19日在日本申请的专利申请号2004-335344号的优先权，通过在这里引用该申请的内容而将其并入至本申请中。

背景技术

现在，在再生医疗领域中正在进行通过在使采集于对象者的干细胞在体外增殖或分化的基础上移植到对象者中来促进对象者的组织的再生的研究。干细胞具有分化成各种组织和器官的多分化功能，作为把握再生医疗关键的细胞而备受关注。

已知，在干细胞的体外培养增殖中，如果在培养基中加入血清，则具有效果，但以治疗人为目的时，从安全性的问题上出发应该避免使用来自于人以外的动物的血清，要求使用由来自于人、特别是采集于对象者的血液调制的血清。另外，与血液检查相比，在再生医疗领域的干细胞培养中需要更多的血清。

作为调制这种血清的方法，例如公开了使用收纳有由玻璃粉末形成的血液凝固促进个体的采血管的方法(参照专利文献1)。另外，还公开了为了迅速地分离混入在血清中的纤维蛋白等凝固物质，使玻璃粉末与血液相接触，从而容易地将含有多种大量生长因子的血清回收的方法(参照专利文献2)。另外，还公开了以人血浆为原料进行制造的方法(参照专利文献3)。进而，还公开了在血浆中添加钙化合物和玻璃珠来获得生长因子的方法(参照专利文献4)。

但是，专利文献1和2中公开的方法由于使用了以血液检查为目的的容量较小的采血管，因此为了调制干细胞培养所必需的量的血清，必须进行多次调制操作，不适于实用。另外，专利文献3中公开的方法由于使用凝血酶作为抗凝固剂，因此在使用生物来源的制品所导致的感染危险残留的方面来看不优选。进而，专利文献4中记载的方法由于将仅少量含有细胞生长因子的血浆作为原料，因此所得血清没有含有充分的细胞生长因子，因而不能高效地培养干细胞。

专利文献1：日本特开2000-000228号公报

专利文献2：日本特开平4-83165号公报

专利文献3：日本特开2001-275662号公报

专利文献4：日本特开2004-269409号公报

发明内容

鉴于上述课题，本发明的目的在于提供大量含有能够高效地促进干细胞增殖的生长因子的血清。

更具体地说，本发明提供以下内容。

(1)一种细胞培养用人血清，其由包含含有血液凝固因子的血液来源的液体成分和血小板的流体获得，采血后的20分钟以内的血小板残存率超过总血小板的0％但为20％以下，且细胞生长因子的释放率为20％～100％。

根据(1)的发明，通过使采血后的20分钟以内的血小板残存率超过总血小板量的0％但为20％以下，可以迅速地促进细胞生长因子的释放。另外，通过使细胞生长因子的释放率为20％～100％，可以高效地使干细胞增殖。另外，通过使用至少含有血液来源的液体成分和血小板的流体，能够生成含有比从血浆调制的量更多的生长因子的血清，从而能够制造具有与胎牛血清同等的细胞增殖效果的血清。

这里，所谓的“血液”是指含有血球(红血球、白血球、血小板)和作为液体成分的血浆(血清)构成的全血，以及含有其中至少1种的液体(例如在成分献血中采集的血液)。另外，“血清”是指放置采集的血液时流动性降低、之后从红色凝固块(血饼)中分离出来的淡黄色液体。本发明中的“血清”是指虽然在不能从血饼中分离出来的方面来看，其生成方法与普通的血清不同，但其所含有的凝固因子或生长因子基本上与普通血清相同的对细胞培养有用的血液中的液体成分。另外，“血液来源的液体成分”是指血球以外的血液成分或者在血球以外的血液成分中添加了抗凝固剂等药剂而得到的混合液。另外，“细胞生长因子”是指血小板生长因子(PDGF)、转化生长因子(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、肝细胞生长因子(HGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、碱性成纤维细胞成长因子(bFGF)等。

另外，“细胞生长因子的释放率”是指将由采集到真空采血管中的规定量的血液调制的血清中的细胞生长因子量作为潜在量(100％释放)，细胞生长因子相对于该潜在量的比例。

(2)一种细胞培养用人血清，其由包含含有血液凝固因子的血液来源的液体成分和血小板的流体获得，其中，上述细胞生长因子的含量比由血浆调制的人血清更多。