[发明专利]嵌合噬菌体衍生的颗粒，它们的制造方法和用途

说明书

发明背景

以往，显示抗原表位的噬菌体是经皮下施予(NatureBiotechnology 18(2000)，873-6)。该文章揭露了丝状噬菌体fd可在其主要壳蛋白的N-端区显示出多个外来肽的拷贝，因此，这样的构造可用于皮下免疫。Nucleic Acids Research 25(1997)，915-916也揭示了噬菌体fd的杂交病毒粒子，其显示出两个不同的肽。有人提出这样的构造在探索疫苗设计上具有许多潜在的优点。

在疫苗学中，最近的研究趋向是对治疗和预防以下疾病的黏膜疫苗的研究。这些疾病包括在人和动物中的(i)癌症，(ii)对过敏原的过敏症(包括对遗传性过敏症疾病的抑制)，和(iii)由致病微生物(包括病毒、细菌、真菌和原生生物)引起的感染。

抗原刺激的主要部位包括结膜、胃肠道、呼吸道和尿道。因此，排列在这些部位的黏膜上皮细胞就构成了内外环境之间的有效的障碍，并起着有机体对感染的最主要的抵抗作用(Salminen et al.，1998，2001)。由于病原体在波及全身之前，通常先与黏膜上皮细胞接触和/或集聚，因此采用黏膜传递疫苗相对于传统的注射疫苗，最明显的优点是它们的引入路线更为逼真地模仿出了这些抗原通常进入宿主的途径。其结果是，黏膜疫苗将引发由先天性和适应性的免疫系统产生的强烈反应，从而可提供比用其他方法，如注射更完全的保护。传统的注射疫苗的问题之一是其模仿了正在发生的全身感染，结果通常是绕过了大部分的免疫系统(特别是先天性免疫系统)，而这些免疫系统通常会在身体首次受到非己抗原刺激时被激发。

已有一些研究表明经黏膜施用疫苗比传统疫苗提供了对抗通过黏膜组织进入体内的病原体的更好保护(Davis，2001)。

为了产生减毒活疫苗，对已知病原体的衍生物进行改造，使其在它们的宿主中表现出减弱的毒力。这样的菌株常被用作减毒活疫苗的活性成分。减毒活疫苗通常给予宿主极好的免疫性，且可引起可持续终生的体液的和细胞的(cellular)免疫。这些疫苗通常在若干施予剂量甚至单次剂量后即产生保护性。然而，减毒活疫苗的配方也具有很大的危险性，且有各种各样的缺点是与其使用相关。其中，最为严重的是减毒菌株可能在体内恢复其毒力，从而导致本来期望由该疫苗预防的疾病的发生。并且由疫苗菌株产生的感染可传递到免疫受损的或未接种的个体，其包括儿童和老人。此外，有时减毒的或去活的疫苗还会产生有害反应，甚至是包括死亡在内的严重的有害反应，这部分归因于疫苗制剂含有多种通常与给指定的微生物相关的定义不清楚的成分。出于这些和其他的原因，减毒疫苗通常不适合用于儿童、老人和免疫受损的个体，包括感染HIV的个体。除了上述这些人群外，医生对健康成年人群的处方也越来越多地选用更安全的替代物(例如，亚单位疫苗)；甚至在这些替代物可显示出某种程度的较低的效率的情况下也是如此(Foss and Mur-taugh，2000)。FDA认识了这些危险，从而对新疫苗产品的开发不断制定出更为严谨的指导方针。新的FDA指导方针要求公司更为精确地定义出他们的疫苗产品的成分，这就使得开发新的减毒活的和失去传染性的疫苗更为困难。这些趋势促使生物技术和制药部门在很大程度上放弃新品种的减毒活疫苗的研究，而转为开发可具有更好定义的组分和安全性能的新的疫苗制剂(例如亚单位疫苗)。

编码抗原因子的基因与疫苗的活的或去活的微生物组分有关，这与它们的施用方法无关。这些基因通过转导、转化和/或结合而水平传播到宿主的常住微生物群中存在实际相当大的危险。这些基因包括不单限于编码毒力因子和抗生素抗性因子的基因。这种转移可发生的频率不仅取决于疫苗的组成，还依赖于施用的方法。由于健康个体中的血液中几乎没有天然微生物群，因此即使通过静脉(IV)施用高水平的活的微生物通常也只存在很小的水平传播的危险。结果，这种施用方法代表了更为安全(尽管更具侵入性)的传递保护性抗原(尽管与注射处感染相关的有害反应等仍值得关注)的路线。与此相反，当活的疫苗被施予到含高水平的具有异质组分的天然常住微生物群的环境中时(例如胃肠道、阴道、呼吸道等)，转移的危险可能很高。结果，将黏膜(例如胃肠道内的、阴道内的、鼻内的等)暴露于减毒活的、重组活的和去活的疫苗微生物就意味着毒力和抗生素抗性基因发生转移的危险，这可导致新的病原体的出现。