[发明专利]通过多重PCR进行RHD和ABO基因分型

说明书

技术领域

本发明涉及基因分析领域。更具体而言，本发明涉及对受试者的基因型进行研究从而进行血型分析。

背景技术

目前使用血清学技术进行的血型测定仅能测定相当有限数目的几种临床上有意义的血型。最近的进展包括使用分子遗传技术进行的血型测定，但是这类测定仅能用于有限的条件，例如：产前测定，此时分离胎儿血液用于血清学研究将会有危险，或者多次输血的患者的血型测定，此时由于患者/供血者的血液混合而使血清学测定变得困难。

目前，由于分子遗传学技术上的限制和目前血清学检测方法相对低廉的成本，还没有进行大规模的血型基因分型。然而，血型血清学有明显的缺陷。例如，用于检测某些血型抗原特异性的可用的试剂数量有限或者可能还没有这类试剂。因此并非所有血型都能进行常规测定。这样就会导致初次异源免疫反应，此时受血者的血液会免疫供血者的红细胞携带的抗原。对所有供血者的血型基因分型可获得更全面的血液检测结果，并可使异源免疫反应和随后的输血反应的发生率降低。

ABO血型是所有人类血型中最显著的，在输入ABO不相容的血液时可导致直接输血反应并可能导致死亡。这是因为A、B和O个体在其血清中携带抗A和/或抗B抗体(由细菌糖抗原产生)，该抗体可与它们自身红细胞中不存在的红细胞A和/或B抗原交叉反应。ABO相容性是输血相关发病和死亡的主要原因，每个供血者和要接受血液、血液产物或实体器官移植的患者都必须确定他们的ABO血型。

通常使用红细胞血清学来确定输血疗法中应用的人类红细胞的ABO血型。尽管血清学技术应用广泛而且价格低廉，但是ABO基因分型还是在常规输血医学上有一定的作用。极少的A和B等位基因会抑制两种抗原系列(例如A3、B3、A_e1、B_e1、A_X和B_X)的表达。这些极少的变种可能在常规的自动ABO分型中被漏检，它们中的一些就会被分型为O型血型。这类等位基因中有很多是杂合ABO基因导致的，只有用分子遗传学技术才能分辨。如果采用分子遗传学技术的血液分型成为替代红细胞血清学的前沿技术，就将会需要开发和应用对ABO基因型的可靠检测(Olsson(2001)Blood 98 1584-1593)。

ABO组织血型系统的A和B抗原由位于第9染色体上的ABO基因座编码的糖基转移酶合成。编码A糖基转移酶的基因是最先被分离、克隆和测序的(Clausen et al(1990)J.Biol.Chem.265 1139-1145；Yamamotoet al(1990)Nature 345 229-233)。序列分析发现了一个1062bp的编码区域，它对应一个41kDa的蛋白质。随后显示这一编码区域分布于7个外显子中(Yamamoto et al(1995)Glycobiology 5 51-58；Bennett etal(1995)Biochem.Biophys.Res.Commun.211 347)，该基因在9q34上横跨一个～20kb的区域。连续编码序列为A101等位基因，所有影响糖基转移酶的特异性和效力的多态性都被认为是这一等位基因的突变。

影响所编码糖基转移酶的特异性和/或效力的大部分突变出现在外显子6和7。然而在较早的外显子中也还有几种重要的突变(Chester &O1sson(2001)Trans.Med.Rev.11 295-313)。编码主要等位基因的突变示于表1。

表1.位于外显子6和7的ABO基因的主要等位基因之间的选定核苷酸的多态性