[发明专利]通过双向电泳同时分离生物分子的方法和仪器

权利要求书

1.用于同时分离包含在至少一个生物样品中的生物分子的双向电泳方法，包括至少以下步骤：

从至少一个第一基质转移，其中所述生物分子被包含在所述生物样品中并基于化学和/或物理特性被整理，在至少一个第二基质上所述生物分子被彼此分离，所述生物分子的转移和分离是应用具有非平行力线的电场引起的。

2.根据权利要求1所述的双向电泳方法，包括进一步的步骤：

处理样品以进行包含在第一基质上的样品中生物分子的第一分离；

处理含有前述步骤获得的样品的第一基质以得到所述生物分子的恒定的电荷/质量比。

3.根据权利要求2所述的双向电泳方法，其中第一向分离是通过带状电泳、圆盘电泳、全同立构电泳、在两性可溶缓冲液中的等电聚焦或通过适当反对流基质的固定pH梯度来实现。

4.根据权利要求3所述的双向电泳方法，其中所述的反对流基质可是连续或颗粒状的，且选自聚丙烯酰胺、琼脂糖、醋酸酯凝胶、交联葡聚糖。

5.根据权利要求3所述的双向电泳方法，其中所述的用于第一向分离的反对流基质可以用塑料支持物或电流可通过的多孔支持物来锚定。

6.根据权利要求5所述的双向电泳方法，其中所述所选的支持物，当其为塑料质地时选自聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶，当其为多孔支持物时选自醋酸纤维素滤膜、尼龙网或玻璃纤维膜。

7.根据权利要求1所述的双向电泳方法，其中被充分插入用于第二向的电泳槽中的所述第一基质，与所述第二个基质通过直接原位聚合的方法融合，以消除两基质间空隙。

8.根据权利要求1所述的双向电泳方法，其中所述的第二基质是有恒定浓度的或存在连续的或非连续的缓冲液中的多孔梯度的聚合物。

9.根据前述权利要求所述的双向电泳方法，其中所述的聚合物选自丙烯酰胺、双丙烯酰胺、琼脂糖或醋酸纤维素。

10.根据权利要求1所述的双向电泳方法，包括在电泳分离前的进一步处理和可选的包括变性和/或还原。

11.根据前述权利要求的双向电泳方法，其中所述的变性是由加热样品导致的热变性，或者通过加入变性和/或还原剂导致的化学变性。

12.根据前述权利要求所述的双向电泳方法，其中所述的变性剂选自尿素、硫尿、表面活性剂和/或有机溶剂或其混合物。

13.根据权利要求11所述的双向电泳方法，其中所述的还原剂选自β-巯基乙醇、二硫苏糖醇或磷酸三丁酯。

14.根据权利要求1所述的双向电泳方法，包括在电泳分离前的进一步处理和可选的包括变性和/或还原以及随后的烷基化。

15.根据前述权利要求所述的双向电泳方法，其中所述的烷基化由选自碘代乙酰胺、丙烯酰胺、N取代丙烯酰胺以及乙烯基吡啶的试剂来实现。

16.表征生物复合样本的方法，其特征在于使用前述权利要求所述的方法。

17.根据前述权利要求所述的方法，包含有更进一步的包含在所述第二基质中且被电泳分离的生物样品的可视化步骤。

18.根据前述权利要求所述的方法，其中所述的可视化是通过光密度测定、放射自显影、化学荧光或荧光、或生物学活性测定实现的。

19.用于同时分离包含在至少一份生物样品中的生物分子的双向电泳方法，包含以下步骤：

准备生物样品；

在至少一个第一基质上实施初步分离以便根据化学和/或物理特性整理生物分子；

处理所述第一基质以实现基于电荷的样品生物分子的均衡；

插入所述第一基质到仪器中，所述仪器包括至少两个电极，将所述第一基质置于所述电极的第一电极和置于所述电极的第二电极附近的至少一个第二基质之间；

将电解溶液加入所述仪器中的由所述电极组成且包含所述基质的区域，在其中产生具有非平行力线的电场；

在所述电极间的区域生成至少一个具有非平行力线的电场，其中所述基质被放置以用于将在所述第一基质上预整理的所述生物分子转移到所述第二基质上并在其中发生进一步的分离。