[发明专利]残粒样脂蛋白中胆固醇的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及残粒样脂蛋白(remnant-like lipoprotein)中胆固醇的测定方法以及测定试剂。

背景技术

近年来，伴随着高龄化，成人病的患病率一直急剧上升。众所周知动脉硬化在其中，特别是循环系统疾病，例如心脏病、脑血管系疾病(脑梗等)的发病中占重要位置。

一方面，胆固醇在血管壁的蓄积对动脉硬化症的发展起重要作用，其中涉及到血液中存在的各种脂蛋白。脂蛋白以胆固醇、胆固醇酯、中性脂肪、磷脂以及载脂蛋白为构成成分，在这些脂蛋白中，高密度脂蛋白(HDL)中的胆固醇被认为是动脉硬化症的危险因子的负因子，低密度脂蛋白(LDL)中的胆固醇被认为是动脉硬化症的危险因子的正因子，它们在临床检查领域被频繁测定。

但是，近年显示，与LDL中的胆固醇相比较，如残粒样脂蛋白的因脂质代谢等生成的脂蛋白中的胆固醇是作为动脉硬化症的危险因子的更加密切的指标。由于这种观点，高效、简便测定生物样品中脂蛋白中的胆固醇正在成为一个课题。

以往，关于残粒样脂蛋白中胆固醇的酶测定方法，有关于以下方法的报道(参考专利文献1和2，非专利文献1)，使用固定有脂蛋白中的构成载脂蛋白的抗体的凝胶、磷脂分解酶或者表面活性剂，提高测定的选择性，通过使胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶发挥作用，将胆固醇酯变换成胆固醇，再测定生成的过氧化氢或还原型辅酶。

但是，在该方法中，在对残粒样脂蛋白的选择性、操作上的简便性·测定时间的长度等方面有优点也有缺点，不能说十分理想。

【专利文献1】日本专利特开平2001-231597号公报

【专利文献2】日本专利第2949354号公报

【非专利文献1】动脉硬化，25(9，10)，371(1998)

发明的揭示

本发明的目的在于，提供更加简便且高精度测定残粒样蛋白质中胆固醇的方法以及进行该方法的试剂。

本发明人，根据上述情况，着眼于大多胆固醇酯酶除了具有酯酶活性之外，还具有脂蛋白脂肪酶活性，研究了各种测定脂蛋白中胆固醇时的条件，结果发现，选择与胆固醇酯酶活性相比较，脂蛋白脂肪酶活性的比率更高的胆固醇酯酶，在使用其和胆固醇氧化酶或胆固醇脱氢酶测定脂蛋白中胆固醇时，对残粒样脂蛋白的选择性高，可以从高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、乳靡微粒(CM)、超低密度脂蛋白(VLDL)、CM残粒、VLDL残粒、中密度脂蛋白(IDL)残粒等含有脂蛋白的生物样品中选择性测定残粒样脂蛋白中的胆固醇。

即，本发明涉及残粒样脂蛋白中胆固醇的测定方法，它是使含有脂蛋白的被测样品与胆固醇酯酶及胆固醇氧化酶或胆固醇脱氢酶作用，再通过测定生成的过氧化氢或还原型辅酶来测定脂蛋白中胆固醇的方法，其特征在于，使用脂蛋白脂肪酶与胆固醇酯酶的活性比率(脂蛋白脂肪酶活性/胆固醇酯酶活性)为12～7000的胆固醇酯酶。

另外，本发明涉及残粒样脂蛋白中胆固醇的测定试剂，其中含有脂蛋白脂肪酶与胆固醇酯酶的活性比率(脂蛋白脂肪酶活性/胆固醇酯酶活性)为12～7000的胆固醇酯酶，以及胆固醇氧化酶或胆固醇脱氢酶。

通过使用本发明的测定方法及测定试剂，可以极简便且灵敏度良好地在短时间内测定残粒样脂蛋白中的胆固醇。

附图说明

【图1】使用LP酶时的LDL的反应特异性的显示图。

【图2】使用LP酶时的HDL的反应特异性的显示图。

【图3】本发明方法中，对非结合-VLDL、结合-VLDL的反应特异性的显示图。

【图4】添加抗体时，对非结合-VLDL及结合-VLDL的反应性的显示图。

【图5】本发明测定方法及已有的测定方法(RLP-II)中，测定血液中的残粒样脂蛋白的相关性的显示图。

具体实施方式

本发明的残粒样脂蛋白中胆固醇的测定方法是使胆固醇酯酶及胆固醇氧化酶或胆固醇脱氢酶起作用，再测定生成的过氧化氢或还原型辅酶的方法，其中使用了脂蛋白脂肪酶(LPL)与胆固醇酯酶(CE)的活性比率(脂蛋白脂肪酶活性/胆固醇酯酶活性)为12～7000的胆固醇酯酶。