[发明专利]表达和纯化重组人类生长激素的方法

权利要求书

1.一种方法，其包含：

a)在含有非天然编码的氨基酸的液体营养培养基中，在有利于生长的条件下，

培养能够生产包含所述非天然编码的氨基酸的hGH的重组宿主细胞；

b)通过所述细胞诱导包含所述非天然编码的氨基酸的hGH的生产；和

c)从所述细胞或培养基纯化所述包含非天然编码的氨基酸的hGH。

2.根据权利要求1所述的方法，其中一种或一种以上非天然编码的氨基酸的所述添加发生在选自由以下时间组成的群组的时间处：连续地在细胞生长期间，在诱导之前的时间，在诱导之时或在诱导之后的时间。

3.根据权利要求2所述的方法，其中一种或一种以上非天然编码的氨基酸的所述添加与诱导同时发生。

4.根据权利要求2所述的方法，其中一种或一种以上非天然编码的氨基酸的所述添加发生在诱导之前大致1小时。

5.一种方法，其包含以下步骤：

(a)使来自权利要求1的步骤c)的包含非天然编码的氨基酸的hGH与阴离子交换色谱基质，在允许所述hGH与所述基质结合的条件下接触；

(b)从所述基质洗提和收集所述hGH；

(c)使来自步骤b)的所述hGH与疏水性相互作用色谱(HIC)基质，在允许所述hGH与所述基质结合的条件下接触；和

(d)从所述HIC基质洗提和收集所述hGH以提供包含非天然编码的氨基酸的大体上纯的hGH。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述重组宿主细胞选自由原核细胞和真核细胞组成的群组。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述大体上纯化的hGH选自由成熟hGH、成熟hGH变体、hGH多肽和hGH多肽变体组成的群组。

8.根据权利要求5所述的方法，其中所述方法包含，在步骤a)之后使从所述阴离子交换色谱法洗提的所述hGH与羟磷灰石色谱基质，在允许所述hGH与所述基质结合的条件下接触，接着从所述羟磷灰石色谱基质洗提和收集所述hGH的额外步骤。

9.一种方法，其包含以下步骤：

(a)使包含非天然编码的氨基酸的hGH与衍生化的聚乙二醇(PEG)，在足以形成hGH-PEG结合物的条件下反应；和

(b)通过使所述hGH-PEG结合物与阴离子交换基质，在允许所述hGH与所述基质结合的条件下接触，接着从所述阴离子交换色谱基质洗提和收集所述hGH，以提供大体上纯化的hGH-PEG结合物来分离和纯化所述hGH-PEG结合物。

10.一种分离大体上纯化的hGH-PEG结合物的方法，其包含以下步骤：

a)在含有非天然编码的氨基酸的液体营养培养基中，在有利于生长的条件下，培养能够生产包含所述非天然编码的氨基酸的hGH的重组宿主细胞；

b)通过所述细胞诱导包含所述非天然编码的氨基酸的hGH的生产；和

c)使来自步骤b)的包含非天然编码的氨基酸的hGH与阴离子交换色谱基质，在允许所述hGH与所述基质结合的条件下接触，接着从所述基质洗提和收集所述hGH；

d)使从步骤c)的所述阴离子交换色谱法洗提的所述hGH与羟磷灰石色谱基质，在允许所述hGH与所述基质结合的条件下接触，接着从所述羟磷灰石色谱基质洗提和收集所述hGH；

e)使来自步骤d)的所述hGH与疏水性相互作用色谱(HIC)基质，在允许所述hGH与所述基质结合的条件下接触，接着从所述HIC基质洗提和收集所述hGH，以提供包含非天然编码的氨基酸的hGH；

f)使来自步骤e)的包含非天然编码的氨基酸的hGH与衍生化的聚乙二醇(PEG)，在足以形成hGH-PEG结合物的条件下反应；和

g)通过使所述hGH-PEG结合物与阴离子交换基质，在允许所述hGH与所述基质结合的条件下接触，接着从所述阴离子交换色谱基质洗提和收集所述hGH，以提供大体上纯化的hGH-PEG结合物来分离和纯化所述hGH-PEG结合物。