[发明专利]抗人可溶性血纤蛋白单克隆抗体及使用该抗体的免疫学测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及不与血纤蛋白原反应而特异性识别于通过血纤蛋白原的凝血 酶消化生成的可溶性血纤蛋白的Aα链C末端区域新产生的结构变化部位的针 对可溶性血纤蛋白的单克隆抗体以及使用该抗体的免疫学测定方法，所述单克隆 抗体利用若该单克隆抗体的识别部位经纤溶酶消化从可溶性血纤蛋白上切离、 则该单克隆抗体与该经纤溶酶消化的可溶性血纤蛋白的反应消失的特性，用于 在不受可溶性血纤蛋白纤溶酶分解产物和稳定化血纤蛋白纤溶酶分解产物的 影响的情况下特异性地检测可溶性血纤蛋白。本发明还涉及通过该免疫学测定方 法测定被测试样中的可溶性血纤蛋白来评价被测试样的凝血亢进状态的方法。

背景技术

伴随凝血纤溶系统的活化而在血中出现的分子标记的检测对于播散性血 管内凝血综合征(DIC)的早期诊断和病情的把握是很重要的。其中，作为表征 初期的凝血亢进的标记，临床上应用可溶性血纤蛋白单体复合物(SFMC)。

在血管内被活化而生成的凝血酶切断血纤蛋白原的Aα链的N末端，将血纤 蛋白原变为desAA血纤蛋白单体，再切断Bβ链的N末端，生成desAABB血纤蛋白 单体，生成的血纤蛋白单体与血中的血纤蛋白原等形成复合物，作为SFMC在血 中循环。已知通过检测该SFMC，可以早期预测血栓形成。

为了检测该SFMC，目前报告了大量的特异性抗体和免疫学测定方法。例如， G.Soe等作为识别血纤蛋白与血纤蛋白原结合而成的血纤蛋白·血纤蛋白原复 合物形成时在E部分产生的结构变化的单克隆抗体，报告了IF-43抗体。IF-43 抗体的表位存在于Aα链的N末端侧的链17-78的氨基酸序列。IF-43抗体具有在 不与由血纤蛋白原、血纤蛋白单体、凝血酶产生的血纤蛋白原分解产物和血纤 蛋白分解产物作用的情况下反映凝血系统的特征(专利文献1和非专利文献1)。

然而，已知使用IF-43抗体的可溶性血纤蛋白测定用试剂(IATRO SF，Iatron 公司制)也作用于血纤蛋白单体的纤溶酶分解产物(血纤蛋白片段X、Y和E)与血 纤蛋白原的反应生成复合物和血纤蛋白单体的纤溶酶分解产物与血纤蛋白原 的纤溶酶分解产物(片段X、Y或D)的反应生成复合物(专利文献2)。如上所述， IF-43抗体也作用于纤溶酶作用了的可溶性血纤蛋白，所以很难说是仅纯粹地 反映凝血系统的抗体。

还报告了识别血纤蛋白原Aα链被凝血酶切断而得的N末端的氨基酸序列 的抗体。U.SCHEEFERS-BORCHEL等将与血纤蛋白的N末端的氨基酸序列同样的合 成六肽(GPRVVE)进行免疫，制成了针对可溶性血纤蛋白特异性的抗体(非专利 文献2)。另一方面，A.Hamano等将血纤蛋白原经巴曲酶(Batroxobin)处理而得 的血纤蛋白单体作为免疫原，得到了针对可溶性血纤蛋白特异性的抗体(专利 文献3和非专利文献3)。

然而，因为这些抗体的表位为凝血酶与Aα链作用而生成的N末端氨基酸序 列部位，所以被认为作用于血纤蛋白单体的纤溶酶分解产物和它们的复合物以 及作为稳定化血纤蛋白的纤溶酶分解产物的XDP部分(DY、DXD等)。因此，反映 凝血系统和纤溶系统这两者，不能说是仅纯粹地反映凝血系统的抗体。

此外，还报告了与由血纤蛋白原的Aα链的链148-161的氨基酸序列构成的 肽反应的单克隆抗体(专利文献4)。该抗体的识别部位不存在于被纤溶酶消化 的Aα链C末端侧，所以被认为与可溶性血纤蛋白的纤溶酶分解产物和稳定化血 纤蛋白的纤溶酶分解产物反应，很难说是仅纯粹地反映凝血系统的抗体。

如上所述，针对于由凝血系统的亢进生成的可溶性血纤蛋白的以往的抗体 大多同时识别由纤溶系统的作用而产生的可溶性血纤蛋白的纤溶酶分解产物 和稳定化血纤蛋白的纤溶酶分解产物，还未发现特异性识别纤溶酶未作用的可 溶性血纤蛋白的抗体，纯粹地反映凝血系统的测定方法也未有报告。

专利文献1：国际公开第95/012617号文本

专利文献2：日本专利特开2004-53359公报

专利文献3：国际公开第98/59047号文本

专利文献4：日本专利特开平2-028197公报

非专利文献1：G.Soe等，Blood.88，2109-2117，1996.

非专利文献2：U.SCHEEFERS-BORCHEL等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.82，709 1-7095，1985.