[发明专利]蛋白的生产

权利要求书

1.在重组蛋白体样组装体(RPBLA)中包含重组融合蛋白的非高等植物真核宿主细胞，所述融合蛋白包含连接在一起的两个序列，其中一个序列为异源于所述宿主细胞的蛋白体诱导序列，另一个序列为感兴趣产物的序列。

2.如权利要求1所述的宿主细胞，其中所述RPBLA的密度为约1.1至1.35g/ml。

3.如权利要求1所述的宿主细胞，其中所述融合蛋白还包含所述蛋白体诱导序列和所述感兴趣产物的序列之间的接头序列。

4.如权利要求1所述的宿主细胞，其中所述蛋白体诱导序列包括醇溶谷蛋白或修饰的醇溶谷蛋白。

5.如权利要求4所述的宿主细胞，其中所述蛋白体诱导序列为醇溶谷蛋白序列。

6.如权利要求5所述的宿主细胞，其中所述醇溶谷蛋白序列为γ-玉米蛋白、α-玉米蛋白或稻米醇溶谷蛋白。

7.生产融合蛋白的方法，包括如下步骤：

(a)用包含可操作地同框连接到(ii)第二核酸序列的(i)第一核酸序列的核酸序列转化非高等植物真核宿主细胞，其中所述第一核酸序列编码蛋白体诱导序列(PBIS)，所述第二核酸序列包含编码感兴趣多肽产物的核酸序列；以及

(b)在适合所述融合蛋白表达和所述表达的融合蛋白组装进重组蛋白体样组装体(RPBLA)的培养条件下维持转化的宿主细胞一段时间。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述第一核酸序列(i)的3’端连接到所述第二核酸序列(ii)的5’端。

9.如权利要求7所述的方法，其中所述核酸编码所述PBIS和感兴趣多肽产物之间的接头序列。

10.如权利要求7所述的方法，其中所述宿主细胞为真菌细胞，尤其是酵母细胞。

11.如权利要求7所述的方法，其中所述宿主细胞为藻类细胞。

12.如权利要求7所述的方法，其中所述宿主细胞为动物细胞，尤其是哺乳动物细胞。

13.如权利要求7所述的方法，还包括回收所述表达的融合蛋白的步骤。

14.如权利要求7所述的方法，其中所述蛋白体诱导序列包括醇溶谷蛋白或修饰的醇溶谷蛋白。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述醇溶谷蛋白序列为修饰的醇溶谷蛋白，其包含：

(a)信号肽序列，

(b)γ-玉米蛋白的重复结构域六肽PPPVHL(SEQ ID NO：1)的一个或多个拷贝的序列，以及

(c)γ-玉米蛋白ProX结构域的全部或部分序列。

16.如权利要求14所述的方法，其中所述醇溶谷蛋白序列为γ-玉米蛋白、α-玉米蛋白或稻米醇溶谷蛋白。

17.如权利要求7所述的方法，其中所述用于转化宿主细胞的核酸序列存在于包含一个或多个调控序列的表达载体中。

18.如权利要求17所述的方法，其中所述一个或多个调控序列包含启动子。

19.包含含有可操作地连接到外源核酸片段的一个或多个调控序列的载体的重组核酸分子，所述外源核酸片段限定了编码融合蛋白的基因，所述融合蛋白包含连接到(ii)感兴趣多肽产物的(i)蛋白体诱导序列。

20.如权利要求19所述的核酸，其中所述载体的所述一个或多个调控序列包含适于在适合的真核宿主细胞中启动所述基因的表达的启动子。