[发明专利]作为胰岛素耐受性的靶标/标记的CD99

说明书

2型糖尿病是在世界范围内重要性快速增长的疾病，可以描述为胰脏β细胞不能以β细胞胰岛素分泌的增强补偿外周胰岛素耐受性(β细胞衰竭)。

可以认为胰岛素耐受性是2型糖尿病发展的第一步，并且在诊断出糖尿病之前数年就已经发生。在这第一个阶段中，患者保持血糖正常，通过增强胰岛素分泌来补偿肌肉和肝对胰岛素应答性的降低。在2型糖尿病发展的较后阶段，β细胞功能降低，引起葡萄糖耐量降低并最终导致糖尿病。已经显示通过减轻体重、锻炼或药物治疗进行早期干预可以延缓或甚至防止在葡萄糖耐量降低的患者中糖尿病的发展(Diabetes Prevention ProgramResearch Group，N.Engl.J.Med.346(2002)393-403)。因此，胰岛素耐受性的早期诊断将允许通过抗糖尿病治疗或防止该疾病发展的其他手段进行早期干预。目前，检测胰岛素耐受性的惟一可靠的可能性是通过正常血糖-高胰岛素钳夹(EHC)。HOMA模型常用于评估胰岛素耐受性，但不是公认的诊断方法(Wallace等，Diabetes Care 27(2004)1487ff.)。由于它们费时费力，因此，这些方法不能成为广泛的患者筛查程序。因此胰岛素耐受性的分子标记将对于该疾病的检测非常有用。

目前最经常使用的2型糖尿病治疗不直接针对胰岛素耐受性。存在对于主要在外周葡萄糖摄取水平下发挥作用的治疗方法(如胰岛素致敏物)的安全性担忧。因此，鉴定其他更好的治疗靶标和比目前常用的标志物(如EHC或HOMA法)更灵敏或更可靠的标志物也是有用的，所述标志物用于检测胰岛素耐受性或功效。

此外，鉴定可以在血浆中检测的标志物也是有利的。

本发明的目的在于鉴定和提供新靶标，所述靶标用于筛选防止、减弱或抑制胰岛素耐受性的化合物和筛选允许在II型糖尿病早期阶段监测和/或诊断胰岛素耐受性并且比目前的更为可靠的标志物。

令人惊奇的是，我们发现使用蛋白质CD99能克服(至少部分克服)目前该领域已知的问题。

CD99是32-kDa跨膜蛋白，已经与单核细胞的迁移以及T细胞和胸腺细胞的分化和凋亡相联系。CD99的生物功能还没有什么了解。

令人惊奇地，在胰岛素耐受性中发现了CD99分泌水平的改变。因此，本发明提供了用于治疗和/或预防胰岛素耐受性的靶标以及用于早期诊断糖尿病中胰岛素耐受性的新标志物。优选地，所述改变为分泌CD99水平的提高。

Endoglin是跨膜蛋白这一事实意味着为了在血浆中出现分泌形式，必须产生Seq ID No.1的序列片段。因此，本发明方法中使用的靶标或通过本发明方法可检测的标志物还包括Seq ID No.1的可溶性片段。这些可溶性片段可以包含蛋白质从成熟序列N端至跨膜结构域前的氨基酸序列或胞质结构域(跨膜结构域后第一个氨基酸至序列C端)的部分或其任何片段。因此，本文使用的术语“CD99”或“蛋白质CD99”应理解为包括Seq ID No.1的可溶性片段以及Seq ID No.1的蛋白质或其与Seq ID No.1至少90％同源的突变体。为了测定两个氨基酸序列之间的百分比同源性，以最优比较目的将序列进行比对(例如为了与另一多肽或核酸分子进行最佳比对，可以在序列中引入缺口)。接着比较相应的氨基酸位置上的氨基酸残基或核苷酸。当一个序列上的位置被与另一序列中相应位置相同的氨基酸残基占据时，则分子在该位置上同源。本文使用的氨基酸“同源性”与氨基酸“同一性”等价。两序列之间的百分比同源性是序列共享的相同位置数的函数(即百分比同源性等于相同位置数/位置总数乘以100)。

在优选的实施方案中，标志物CD99由可通过实施例4中所述ELISA检测的Seq ID No.1的任何片段或突变的或天然形式组成。

在优选的实施方案中，新靶标和/或标志物CD99可用于诊断、监测以及筛选目的。

用于患者监测时，本发明的诊断方法可帮助在患者随访中评估疗效和胰岛素耐受性的复发。因此，本发明提供蛋白质CD99用于监测糖尿病疗效的用途。

在优选的实施方案中，本发明的诊断方法用于患者筛选目的。即用于通过测量CD99水平并将CD99水平与胰岛素耐受性存在与否进行联系来在没有糖尿病先期诊断的情况下评估受试者。

本发明的方法可用于通过引起糖尿病的不同阶段(即胰岛素耐受性、葡萄糖耐量降低和糖尿病)来监测疾病的发展。