[发明专利]PCV2免疫原性组合物和产生这种组合物的方法

权利要求书

1.一种回收PCV2的开放阅读框2表达的重组蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：

A)将所述PCV2的重组开放阅读框2克隆入转运载体中；

B)将所述转运载体中含有所述重组开放阅读框2的部分转染入病毒中；

C)用所述病毒感染培养基中的细胞；

D)使所述病毒由所述开放阅读框2表达所述蛋白；

E)分离细胞与上清液中的所述载体；和

F)回收所述上清液中所述开放阅读框2表达的蛋白。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括由PCV2毒株扩增所述开放阅读框2，然后将所述开放阅读框克隆入所述转运载体的步骤。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组开放阅读框2还包含选自5′Kozak序列、3′EcoR1位点的序列或其组合。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述5′Kozak序列包含SEQ ID NO：1。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述3′EcoR1位点包含SEQ ID NO：2。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCV2开放阅读框包含SEQ IDNO：4。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组蛋白包含SEQ ID NO：6。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养基包括无血清昆虫细胞培养基。

9.如权利要求1所述的方法，还包括以下步骤：

i)在步骤A之前，将所述扩增的开放阅读框2克隆入第一载体；

ii)从所述第一载体上切下所述开放阅读框2；和

iii)将所述切下的开放阅读框2用于步骤A。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞包括SF+细胞。

11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述病毒包括杆状病毒。

12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述转染部分包括SEQ ID NO：4。

13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，用所述病毒感染细胞至少5天后回收所述上清液中的所述开放阅读框2蛋白。

14.一种制备引发对PCV2免疫应答的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

i)将一构建物转染入病毒中，所述构建物包含PCV2开放阅读框2的重组DNA；

ii)用所述转染的病毒感染细胞，在生长培养基中培养所述细胞；

iii)使所述病毒由所述开放阅读框2表达所述重组蛋白；

iv)回收上清液中所述表达的开放阅读框2蛋白；和

v)将所述回收蛋白与合适佐剂或其它药学上可接受的运载体或赋形剂混合。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述方法还包括由转运载体中获得所述构建物的步骤。

16.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述方法还包括由PCV2毒株扩增所述开放阅读框2，然后将所述开放阅读框2克隆入所述转运载体的步骤。

17.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述重组开放阅读框2还包含选自5′Kozak序列、3′EcoR1位点的序列或其组合。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述5′Kozak序列包含SEQ ID NO：1。

19.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述3′EcoR1位点包含SEQ ID NO：2。

20.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述PCV2开放阅读框2包含SEQ ID NO：4。

21.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述重组蛋白包含SEQ ID NO：6。

22.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述培养基包括无血清昆虫细胞培养基。