[发明专利]重组血清白蛋白的生产

权利要求书

1.在丝状真菌宿主生物体中重组表达野生型血清白蛋白多肽的方法，该方法包括在丝状真菌宿主生物体中表达编码野生型血清白蛋白多肽的修饰的核酸序列，其中修饰的核酸序列的至少一个密码子不同于编码所述野生型血清白蛋白多肽的每种野生型核酸序列。

2.在丝状真菌宿主生物体中重组表达野生型血清白蛋白的方法，包括步骤：

i)提供编码野生型血清白蛋白的核酸序列，所述核酸序列包含至少一个修饰的密码子，其中修饰不改变所述密码子编码的氨基酸，而且所述密码子的核酸序列与编码野生型基因的核酸序列中的对应密码子相比是不同的；

ii)在丝状真菌宿主中表达修饰的核酸序列。

3.依照权利要求1或2任一项的方法，其中血清白蛋白是牛血清白蛋白。

4.依照权利要求1或2任一项的方法，其中血清白蛋白是人血清白蛋白。

5.依照权利要求2的方法，其中编码野生型基因的核酸序列是SEQ IDNO：1或3的序列。

6.依照权利要求1的方法，其中至少2个密码子已经被修饰，特别是至少3个密码子，更特别是至少5个密码子，更特别是至少10个密码子，甚至更特别是至少15个密码子，最特别是至少25个密码子已经被修饰。

7.依照权利要求1的方法，其中至少10％的密码子，特别至少20％，更特别至少30％，更特别至少50％，更特别至少75％的密码子被修饰。

8.依照权利要求1的方法，其中至少一个密码子的修饰产生密码子优化以适合在选择的宿主生物体中翻译。

9.依照权利要求7的方法，其中为在丝状真菌中进行翻译优化至少一个密码子。

10.依照权利要求8的方法，其中至少一个修饰的密码子的密码子选择相当于来自米曲霉的α淀粉酶的密码子选择。

11.依照在前任一项权利要求的方法，其中丝状真菌宿主生物体选自支顶孢属、曲霉属、镰孢属、腐质霉属、毛霉属、毁丝霉属、脉孢菌属、青霉属、梭孢壳属、Tolypocladium或木霉属。

12.依照权利要求11的方法，其中曲霉属细胞是泡盛曲霉、臭曲霉、日本曲霉、黑曲霉、构巢曲霉或米曲霉。

13.依照权利要求11的方法，其中宿主细胞是米曲霉或黑曲霉。

14.依照权利要求7的方法，其中血清白蛋白蛋白质由至少10％的密码子，特别地至少20％、更特别至少30％，更特别至少50％，更特别至少75％的密码子被优化的核酸序列编码。

15.依照在前任一项权利要求的方法，其中编码BSA或HSA的修饰的核酸序列选自由SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7组成的组。

16.编码野生型牛血清白蛋白多肽的能在丝状真菌宿主生物体中表达的修饰的核酸序列，其中所述修饰的核酸序列的至少一个密码子不同于编码所述野生型牛血清白蛋白多肽的每个野生型核酸序列。

17.编码野生型人血清白蛋白多肽的能在丝状真菌宿主生物体中表达的修饰的核酸序列，其中所述修饰的核酸序列的至少一个密码子不同于编码所述野生型人血清白蛋白多肽的每个野生型核酸序列。

18.编码BSA蛋白质并能在丝状真菌宿主生物体中表达的修饰的核酸序列，其中通过如下步骤获取修饰的核酸序列：

i)提供编码BSA的野生型核酸序列；

ii)修饰至少一个密码子，其中修饰不改变所述密码子编码的氨基酸，而且所述密码子的核酸序列与野生型基因中的对应密码子相比是不同的。

19.编码HSA蛋白质并能在丝状真菌宿主生物体中表达的修饰的核酸序列，其中通过如下步骤获取修饰的核酸序列：

i)提供编码HSA的野生型核酸序列；

ii)修饰至少一个密码子，其中修饰不改变所述密码子编码的氨基酸，而且所述密码子的核酸序列与野生型基因中的对应密码子相比是不同的。

20.依照权利要求15或16任一项的修饰的核酸序列，其中至少一个密码子的修饰产生密码子优化以适合在曲霉属菌种中翻译。

21.依照权利要求16的修饰的核酸序列，其中密码子选择相当于来自米曲霉的α淀粉酶的密码子选择。