[发明专利]用于骨折愈合的半固体混合纤维蛋白成骨细胞成分及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于骨结合的含有纤维蛋白的半固体成骨细胞成分及其制备方法。本发明尤其涉及一种用于骨结合的含有纤维蛋白的半固体成骨细胞成分，其提供了一种含有成骨细胞和纤维蛋白混合物的治疗剂，可以注入到患病区域使骨结合来治疗严重的骨折，及其制备方法。

背景技术

一般地，简单的骨折可以通过固定几个星期骨折部位完全愈合，但是严重的骨折或骨缺陷需要骨移植。

大多数医生首选的骨移植方法是自体移植，包括从患者身体的某一部位收集骨，尤其是髂脊，接下来移植到患者的患病区域。由于移植的是患者自己的骨骼，这种方法能得到极好的结果。然而，这种自体移植的缺点是这种手术方法会伴随有严重的疼痛，并且存在多种潜在问题，在骨接受区可能出现敏感度和感觉降低，为了骨移植需要额外的手术，长时间的住院治疗，痊愈医疗费用增加。另外，在身体里没有足够的额外骨骼用于移植，这种自体移植为了保护贡献部位需克服许多困难。据报道如果脊髓手术迫使大量骨移植，由于骨自体移植引起的并发症发病率高达23％。

为了缓解自体移植上述缺点的异体移植，主要是从尸体获得骨，不必为了骨移植做额外二次手术，但是具有致命的缺点，例如在灭菌过程中骨强度降低，出现移植排斥，具有被传染性疾病感染的可能性，例如肝炎和艾滋病。另外，异体移植具有以下缺点：低骨形成作用，免疫反应，骨吸收及相关骨骼再骨折，应用范围窄。因此，这种手术方法由于食品药品监督部门为了抵制感染加强骨组织库管理从1993年底开始减少。

同时，骨髓注射是基于Huggins(1931)，Friedenstein(1973)，和Ashton(1980)声明的技术，其中来自骨髓的骨原细胞促进并推动骨形成。骨髓注射在治疗骨折时通常单独使用，但也在骨移植中使用。与其它骨移植技术不同，这用骨髓注射供体不需切开皮肤，有利于降低供体发病率，没有并发症或副作用。

其后，尽管大量临床应用病例获得好结果被报道，骨髓注射的缺点是不具有健全的理论基础，获得的相当一部分结果间不具有一致性，从一个位置收集的骨髓数量是有限的，骨髓中的骨原细胞的数量是相当有限的。

发明内容

因此，基于上述问题本发明的目的在于提供一种用于骨结合含有纤维蛋白的半固体成骨细胞成分及其制备方法，通过向骨结合的部位注射成骨细胞和纤维蛋白的混合物，无临床移植排异，通过注射适于一定程度的这用成分可以获得有效、快速的骨结合，为了减轻由于注射的成骨细胞从骨结合区域逃逸而造成的非必要区域骨组织形成及成骨细胞通过血流增生的问题，这个问题是由于单独注射成骨细胞悬浮液而造成的。

本发明的另一个目的是提供一种用于骨结合的含有纤维蛋白的半固体成骨细胞成分及其制备方法，当成骨细胞和纤维蛋白的混合物注射到骨结合部位时，进行外科手术只需一个最小的切口，通过简单有效地注射成骨细胞和纤维蛋白的混合物获得骨结合，利用放射线无需在相关受损区域切口。

与本发明的一个方面一致，上述及其它目的通过提供一种制备用于骨结合的含有纤维蛋白的半固体成骨细胞成分来实现，包括：从骨组织中分离成骨细胞，在DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)或者α-MEM(Minimum Essential Medium，Alpha Modification)中培养/增生分离的成骨细胞，制备成骨细胞悬浮液；及将成骨细胞悬浮液与凝固因子混合制备成骨细胞治疗剂。

其中，凝固因子是凝血酶和纤维蛋白原的混合物。

其中，治疗剂的制备步骤包括：冻干的凝血酶溶解在液体DMEM或者α-MEM中，将1-100IU/mL的溶解凝血酶与成骨细胞混合溶液混合；冻干的纤维蛋白原溶解在液体DMEM或者α-MEM中，将20-100mg/mL的溶解纤维蛋白原与含有凝血酶的成骨细胞混合溶液混合。

与本发明的另一个方面一致，提供了一种上述方法制备的成骨细胞成分，所述方法是制备用于骨结合的含有纤维蛋白的半固体成骨细胞成分。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

与本发明一种用于骨结合的含有纤维蛋白的半固体成骨细胞成分及其制备方法相一致，如上所述，能够使骨移植，通过向骨结合的部位注射成骨细胞和纤维蛋白的混合物，无临床移植排异，通过注射适合的一定程度的成分可以获得有效、快速的骨结合，为了减轻由于注射的成骨细胞从骨结合区域逃逸而造成的非必要区域骨组织形成及成骨细胞通过血流增生的问题，这个问题是由于单独注射成骨细胞悬浮液而造成的。