[发明专利]在脊椎动物中作为遗传操作和分析工具的piggyBac

权利要求书

1.一种产生培养的重组脊椎动物细胞的方法，所述细胞的基因组 包含携带至少1.5kb的插入片段的piggyBac样转座子，所述方法包括 以下步骤：

(a)将(i)含携带至少1.5kb的插入片段的piggyBac样转座子的核 酸和(ii)在同一核酸中或在独立的核酸上的、与启动子有效连接的编码 piggyBac样转座酶的核苷酸序列导入到培养的脊椎动物细胞中；和

(b)在其中表达piggyBac样转座酶的条件下培养所述细胞，这样 所述piggyBac样转座子被整合入所述培养的脊椎动物的基因组中，

由此产生培养的重组脊椎动物细胞，其基因组包含携带至少1.5 kb的插入片段的piggyBac样转座子。

2.一种产生培养的重组脊椎动物细胞的方法，所述细胞的基因组 包含携带至少1.5kb的插入片段的piggyBac样转座子，所述piggyBacc 样转座子包含编码在脊椎动物疾病或障碍的治疗或预防中有价值的 蛋白的核苷酸序列，所述方法包括以下步骤：

(a)将(i)含携带至少1.5kb的插入片段的piggyBac样转座子的核 酸和(ii)在同一核酸中或在独立的核酸上的、与启动子有效连接的编码 piggyBac样转座酶的核苷酸序列导入到培养的脊椎动物细胞中，所述 piggyBacc样转座子包含编码在脊椎动物疾病或障碍的治疗或预防中 有价值的蛋白的核苷酸序列；

(b)在其中表达piggyBac样转座酶的条件下培养所述细胞，这样 所述piggyBac样转座子被整合入所述培养的脊椎动物细胞基因组中，

由此产生培养的重组脊椎动物细胞，其基因组含携带至少1.5kb 的插入片段的piggyBac样转座子，所述piggyBacc样转座子包含编码 在脊椎动物疾病或障碍的治疗或预防中有价值的蛋白的核苷酸序列。

3.一种产生培养的重组脊椎动物细胞的方法，所述细胞的基因组 包含携带至少1.5kb的插入片段的piggyBac样转座子，其中所述 piggyBac样转座子位于串联体中，所述串联体包含多个piggyBac样转 座子，所述方法包括以下步骤：

(a)将(i)含携带至少1.5kb的插入片段的piggyBac样转座子的线 性化核酸和(ii)在同一核酸中或在独立的核酸上的、与启动子有效连接 的编码piggyBac样转座酶的核苷酸序列导入到培养的脊椎动物细胞 中；

(b)在其中表达piggyBac样转座酶的条件下培养所述细胞，这样 所述piggyBac样转座子被整合入所述培养的脊椎动物细胞基因组中，

由此产生培养的重组脊椎动物细胞，所述细胞的基因组含携带至 少1.5kb的插入片段的piggyBac样转座子，其中所述piggyBac样转 座子位于串联体中，所述串联体包含多个piggyBac样转座子。

4.权利要求1的方法，其中所述脊椎动物细胞为卵母细胞或胚胎 细胞。

5.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述脊椎动物细胞是哺乳 动物细胞。

6.权利要求5的方法，其中所述哺乳动物细胞是人细胞。

7.权利要求1-3中的任一项的方法，其中所述piggyBac样转座 子是piggyBac转座子，和/或piggyBac样转座酶是piggyBac转座酶。

8.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述piggBac样转座子 携带至少4kb的插入片段。