[发明专利]一种预测妊娠不良结局发生风险的试剂盒

权利要求书

1.用于扩增含E112D单核苷酸多态性位点的脯氨酸羧肽酶基因片断的特异性 引物和限制性内切酶AvaII及其缓冲液在制备用于预测妊娠不良结局发生风 险的试剂盒中的应用，其中，所述特异性引物序列为：

正向引物：5’ATGGTTTGCCAAAAGGTTCA 3’，

反向引物：5’TGTCACCAAAGGGGAGAGAC 3’；

所述限制性内切酶AVaII能够特异性识别并切断所述位点处的突变型序列；

利用脯氨酸羧肽酶基因的E112D单核苷酸多态性位点基因型与妊娠不良结 局发生率之间的关系，预测妊娠不良结局的发生风险：当基因型为112EE纯 合野生型时，妊娠不良结局发生率较低；当基因型为112ED杂合型或者 112DD纯合突变型时，妊娠不良结局发生率较高；所述妊娠不良结局包括先 兆早产、早产、宫内发育迟缓、低出生体重、妊娠高血压综合症以及先兆子 痫和子痫。

2.用于扩增含E112D单核苷酸多态性位点的脯氨酸羧肽酶基因片断的特异性 引物和检测脯氨酸羧肽酶基因E112D单核苷酸多态性位点的野生型探针和/ 或突变型探针在制备用于预测妊娠不良结局发生风险的试剂盒中的应用，其 中，所述特异性引物序列为：

正向引物：5’GTTTGCCAAAAGGTTCAGTGACTT 3’，

反向引物：5’TCTCCATAGTATCGATGTTCAGCAAAC 3’；

所述探针为Taqman探针，其序列为：

野生型探针：VIC-5’CATAGCTTTCAGTTCCTCA 3’-NFQ

对应于“T”等位基因，携带VIC荧光报告集团；

突变型探针：FAM-5’ATAGCTTTCAGGTCCTCA 3’-NFQ

对应于“G”等位基因，携带FAM荧光报告集团；

利用脯氨酸羧肽酶基因的E112D单核苷酸多态性位点基因型与妊娠不良结 局发生率之间的关系，预测妊娠不良结局的发生风险：当基因型为112EE纯 合野生型时，妊娠不良结局发生率较低；当基因型为112ED杂合型或者 112DD纯合突变型时，妊娠不良结局发生率较高；所述妊娠不良结局包括先 兆早产、早产、宫内发育迟缓、低出生体重、妊娠高血压综合症以及先兆子 痫和子痫。

3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述试剂盒进一步包括核酸提 取试剂、PCR反应试剂和/或阳性对照模板。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述PCR反应试剂含有四种脱氧 单核苷酸、耐热DNA聚合酶及其反应缓冲液。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述阳性对照模板包括含有脯氨酸 羧肽酶基因E112D单核苷酸多态性位点的纯合野生型、杂合型和/或纯合突 变型序列的PCR产物、克隆质粒或基因组DNA。