[发明专利]一种优化的单克隆抗体

权利要求书

1.一种根据宿主细胞种属所特有的蛋白基因密码子使用频率来优化抗CD20抗体的表达水平的方法，其特征为：

a)确定宿主细胞中蛋白基因密码子的使用频率；

b)选择各氨基酸的密码子使用频率最高的为优选密码子，使用频率第二高的为较优选密码子，其余使用频率较低的为非优选密码子；

c)将蛋白基因序列中一定比例的非优选密码子替换成优选密码子或较优选密码子；

d)检查CG序列的个数，在保证非优选密码子替换率的基础上减少或不增加CG序列的数目；

e)将密码子优化的蛋白基因插入一个真核表达载体；

f)将含有目标蛋白基因的表达载体转染哺乳动物细胞进行高效表达。

2.权利要求1所述的方法，其特征在于非优选密码子替换比例是20-85％。

3.权利要求1所述的方法，其特征在于所优化的抗CD20抗体的来源选自鼠源抗体、人源抗体或人鼠嵌合抗体。

4.一种采用权利要求1所述方法优化获得的抗CD20单克隆抗体DNA分子，其特征在于抗体的轻链可变区的DNA分子的序列为SEQ ID NO：3，重链可变区的DNA分子为SEQ ID NO：7。

5.一种优化的抗CD20单克隆抗体表达载体，包含权利要求4所述的DNA分子，其具体结构见附图5的pIRESneo3dhfr-anti-CD20载体。

6.一种抗体表达方法，其特征在于用权利要求5所述的表达载体在中国仓鼠卵巢细胞中表达CD20抗体蛋白。