[发明专利]稳定高产发菜多糖的发菜细胞高密度培养的方法无效
申请号: | 200610013589.4 | 申请日: | 2006-04-29 |
公开(公告)号: | CN101063085A | 公开(公告)日: | 2007-10-31 |
发明(设计)人: | 贾士儒;于海峰;苏建宇;林永贤 | 申请(专利权)人: | 天津科技大学 |
主分类号: | C12N1/12 | 分类号: | C12N1/12;C12P19/04 |
代理公司: | 天津盛理知识产权代理有限公司 | 代理人: | 王来佳 |
地址: | 300222天*** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 稳定 高产 发菜 多糖 细胞 高密度 培养 方法 | ||
1.一种稳定高产发菜多糖的发菜细胞高密度培养的方法,其特征在于:该方法的步骤为:
(1)预培养发菜细胞种;
(2)调节摇瓶或密闭式生物反应器内的培养基初始pH7.0以上,在该基础培养基里按照5%~15%(v/v)的接种量接种接入预培养的发菜细胞种,培养温度20~30℃;
(3)发菜细胞生长进入稳定期后期结束培养,收集发菜细胞及培养液。
2.根据权利要求1所述的稳定高产发菜多糖的发菜细胞高密度培养的方法,其特征在于:
所述的发菜细胞种的预培养方法为:
发菜细胞预培养的液体培养基为添加葡萄糖的预培养基,按OD750约为0.05的接种量接种到预培养基中,在20~30℃温度条件下静止培养,光照强度为40~90μmol/m2.s,培养4~6d,离心收集细胞,用无菌水重新悬浮,培养出的细胞即为发菜细胞种。
3.根据权利要求1所述的稳定高产发菜多糖的发菜细胞高密度培养的方法,其特征在于:所述的基础培养基由碳源、氮源和微量元素组成,其中采用的碳源为有机碳源包括葡萄糖或乙酸钠或蔗糖或乳糖或以上两种或两种以上的混合物。
4.根据权利要求1所述的稳定高产发菜多糖的发菜细胞高密度培养的方法,其特征在于:采用摇瓶培养发菜细胞可采用白色荧光灯连续光照,光照强度为40~90μmol/m2.s;转速在120~160r/min。
5.根据权利要求1所述的稳定高产发菜多糖的发菜细胞高密度培养的方法,其特征在于:采用密闭式生物反应器培养发菜细胞可采用白色荧光灯连续光照,光照强度为40~160μmol/m2.s,通气量为0.06~0.1vvm。
6.根据权利要求3所述的稳定高产发菜多糖的发菜细胞高密度培养的方法,其特征在于:所述的基础培养基的碳源浓度为0.5~10g/L,优选为2.0~4.5g/L最好为4.0g/L;所述氮源浓度为0.5~10g/L,优选为1.0~4.5g/L,最好为2.25g/L。
7.根据权利要求3或6所述的稳定高产发菜多糖的发菜细胞高密度培养的方法,其特征在于:所述的碳源优选乙酸钠和葡萄糖或其混合物,氮源优选无机氮化合物硝酸钠。
8.根据权利要求1所述的稳定高产发菜多糖的发菜细胞高密度培养的方法,其特征在于:当基础培养液pH值低于7时,可用10%氢氧化钠溶液进行中和调节。
9.根据权利要求5所述的稳定高产发菜多糖的发菜细胞高密度培养的方法,其特征在于:采用密闭式生物反应器培养发菜细胞可以在接种后48h进行补料,之后每隔12~24h补料;补料是加入葡萄糖及硝酸钠溶液,所补料葡萄糖浓度2~6g/L,硝酸钠浓度0.5~1.5g/L。
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