[发明专利]一种蒲黄药材的提取分离方法

权利要求书

1.一种蒲黄提取、分离的方法，包括如下步骤：

(1)提取工艺：称取蒲黄药材，将其粉碎后过筛，然后加入8倍量体积比为1∶1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流1小时，提取2次，合并滤液得提取液fr.1；在药渣中加入8倍量70％乙醇，加热回流1小时，提取2次，合并滤液得提取液fr.2；在药渣中最后加入水，加热回流1小时，提取2次，合并滤液得提取液fr.3；

(2)分离工艺：将提取液fr.1浓缩成浸膏，用硅胶拌样，采用正相硅胶柱对其进行分离，首先用体积比为50∶1的石油醚和乙酸乙酯作为流动相，得洗脱液fr.4，然后改换体积比为10∶1的氯仿和甲醇作为流动相，得洗脱液fr.5，最后用甲醇作为流动相，得洗脱液fr.6；将提取液fr.2浓缩成浸膏，用5％甲醇溶解上样，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用5％甲醇作为流动相，得洗脱液fr.7，然后改换70％甲醇作为流动相，得洗脱液fr.8，最后用100％甲醇溶液作为流动相，得洗脱液fr.9；

(3)制备分离工艺：用制备液相色谱继续分离fr.5和fr.8；

fr.5分离条件：色谱柱为Agilent，制备柱Zorbax SB-C18；21.2mm×250mm；采用梯度洗脱，流动相A为水和B为乙腈，流速为10ml/min，柱温为室温，洗脱梯度如下：

0min时，流动相A为95％的水溶液、流动相B为5％的乙腈溶液；

45min时，流动相A为5％的水溶液、流动相B为95％的乙腈溶液；

55min时，流动相A为5％的水溶液、流动相B为95％的乙腈溶液；

fr.5分离结果：由制备液相色谱分离得到的组分及相应的收集时间如下：

组分fr.51，收集时间3.0-7.6min；

组分fr.52，收集时间7.6-12.7min；

组分fr.53，收集时间12.7-17.0min；

组分fr.54，收集时间17.0-24.1min；

组分fr.55，收集时间24.1-29.0min；

组分fr.56，收集时间29.0-34.1min；

组分fr.57，收集时间34.1-43.3min；

组分fr.58，收集时间43.3-55.0min；

fr.8分离条件：色谱柱为Agilent制备柱Zorbax SB-C18；21.2mm×250mm；采用梯度洗脱，流动相A为水和B为乙腈，流速为10ml/min，柱温为室温，洗脱梯度如下：

0min时，流动相A为90％的水溶液、流动相B为10％的乙腈溶液；

30min时，流动相A为75％的水溶液、流动相B为25％的乙腈溶液；

45min时，流动相A为5％的水溶液、流动相B为95％的乙腈溶液；

fr.8分离结果：由制备液相色谱分离得到的组分及相应的收集时间如下：

组分fr.81，3.0-8.0min；

组分fr.82，8.0-11.0min；

组分fr.83，11.0-16.4min；

组分fr.84，16.4-26.0min；

组分fr.85，26.0-30.2min；

组分fr.86，30.2-36.5min；

组分fr.87，36.5-45.0min。

2.如权利要求1所述的蒲黄提取、分离的方法，其特征在于：

组分fr.53中主要化合物为7-甲基-4-三十烷酮；

组分fr.54中主要化合物为异鼠李素-3-O-β-半乳糖苷。

3.如权利要求1所述的蒲黄提取、分离的方法，其特征在于：

组分fr.85中主要化合物为山奈素-3-O-新橙皮糖苷；3-吡喃葡萄糖氧基-4′，5，7-三羟基-3′-甲氧基黄酮；2″-O-α-L-吡喃鼠李糖；

组分fr.86中主要化合物为3-吡喃葡萄糖氧基-4′，5，7-三羟基-3′-甲氧基黄酮；2″-O-α-L-吡喃鼠李糖；异鼠李素-3-O-芸香糖苷。