[发明专利]预防鸡新城疫、传染性支气管炎和产蛋下降综合征的三联灭活疫苗的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于预防家禽传染病的疫苗，尤其涉及一种预防鸡新城疫、传染性支气管炎和产蛋下降综合征的三联灭活疫苗的制备方法。

背景技术

鸡新城疫、传染性支气管炎M₄₁株(呼吸型和HN₉₉肾型双价)、产蛋下降综合征四种传染病对养鸡业危害十分严重，目前仅有相应的单项灭活苗，如鸡新城疫灭活苗、传染性支气管炎(单价)灭活苗、产蛋下降综合征疫苗，需要单独注射，手续繁琐使用很不方便，防疫成本又高。

发明内容

本发明的目的是提供一种打一针预防四种传染病的鸡新城疫、传染性支气管炎(呼吸型和肾型)、产蛋下降综合征的三联灭活疫苗的制备方法。

本发明采用以下技术方案来实现上述目的：预防鸡新城疫、传染性支气管炎和产蛋下降综合征的三联灭活疫苗的制备方法，选用毒种为新城疫病毒La Sota株、传染性支气管炎病毒M₄₁和HN₉₉肾型变异株、EDS₇₆京911株，制备三联疫苗的步骤如下：

(1)、将新城疫病毒La Sota株，传染性支气管炎病毒M₄₁和HN₉₉肾型变异株、EDS₇₆京911株稀释后接种SPF鸡胚尿囊腔内，收取胚液作为毒种；

(2)、将La Sota株、M₄₁株和HN₉₉株、EDS₇₆京911株的毒种稀释后分别接种易感鸡胚尿囊腔，分别收获La Sota株、M₄₁株和HN₉₉、EDS₇₆京911株的鸡胚病毒尿囊液；

(3)、将病毒尿囊液浓缩；

(4)、浓缩后的4种病毒液分别加入灭活剂灭活，等量混合后乳化制成单相油乳剂灭活疫苗。

所述的乳化法为将体积份数92-95份的兽用白油、5-8份的司本-80和占兽用白油与司本-80总重量1％-3％的硬脂酸铝混合、加热熔化并灭菌后冷却为油相；将4种灭活浓缩病毒液等量混合并充分振荡，加入占其体积百分比4％-5％的吐温-80混合为水相；按水相与油相体积比1∶3-4的比例，乳化制成单相油乳剂灭活疫苗。

灭活剂为体积百分比浓度0.1％-0.2％的甲醛水溶液，灭活时间为12-24小时。

鸡肾型传染性支气管炎HN₉₉株病毒为新分离鉴定的病毒，其具有以下特征：

(1)在电镜下见有冠状病毒粒子，直径90～105nm，有囊膜，周围有长约18nm的梨状突出，呈放射状排列；

(2)、发病鸡症状除呼吸道症状外，大部份死鸡均有肾脏肿大、尿酸盐沉积、花斑肾等病变。

(3)、病毒分离物对NDV La Sota株病毒的繁殖产生干扰；

(4)、病毒分离物对1％鸡红细胞不产生凝集；

(5)、回归SPF鸡试验可出现呼吸道症状和肾肿、花斑肾等病变；

(6)、特异性血清中和结果证明，病鸡的病毒分离物与HN₉₉阳性血清呈阳性反应，而与NDV La Sota株、IBDV B₈₇株、AIV H₉N₂株均呈阴性反应；

(7)、将HN₉₉株阳性血清与EID₅₀的M₄₁株、Holte株、Gray株、T株和地方分离株湖北株、哈尔滨株、山东株、北京株、上海株、天津株等病毒做血清中和试验，结果显示，HN₉₉株阳性血清与T株、湖北株、天津株和山东株呈阳性反应，与其他株病毒均呈阴性反应。

使用三联疫苗可以做到打一针防四种病-鸡新城疫、鸡肾型传染性支气管炎、鸡呼吸型传染性支气管炎、鸡产蛋下降综合征，减少打针次数，降低防疫成本，使用方便，经济实用。疫苗安全性好，用正常剂量的4倍注射鸡，表现安全未见全身症状和局部反应。疫苗效力好，每鸡注射1羽份(0.5ml)，即能抵抗以上4种传染病的发生。HN₉₉株病毒首次于制造鸡的三联灭活疫苗，HN₉₉肾型变异株为新分离鉴定的病毒，该病毒株免疫原性良好，能有效预防鸡肾型传染性支气管炎传染病，保护率达到80～100％；该病毒株特异性强，专门预防鸡肾型传染性支气管炎，这是其他病毒株不能替代的。