[发明专利]抗幽门螺杆菌菌体和细胞毒素鸡卵黄抗体产品、制备及其应用

说明书

一、技术领域

本发明涉及了一种具有抗体活性的产品——抗幽门螺杆菌菌体和细胞毒素鸡卵黄抗体，并涉及其制造工艺及应用。

二、技术背景

1982年，澳大利亚学者巴里·马歇尔和罗宾·沃伦发现了幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)，证明该细菌感染胃部会导致胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡，并因此获得了2005年诺贝尔生理学及医学奖。

流行病学调查资料表明，我国人群中Hp的感染率约为40％～60％。由于Hp的生存环境特殊，药物不易到达，所以根治的难度很大。目前，临床治疗Hp的感染多采用三联疗法、四联疗法，即采用抗生素、抗病毒药和抑酸类药物联合使用。但是，这些疗法药物用量大，时间长，副反应强烈，使患者难以忍受，而且耐药性不断增加，疗效越来越差。因此，采用被动免疫保护是防治幽门螺杆菌感染的一条新途径。

现有技术中未见使用幽门螺杆菌菌体和细胞毒素组成多价抗原，免疫健康母鸡，再从其所产的卵中提取抗幽门螺杆菌菌体和细胞毒素鸡卵黄抗体的报道。

三、发明内容

本发明提供了一种具有抗体活性的产品——抗幽门螺杆菌菌体和细胞毒素鸡卵黄抗体；

本发明提供了上述具有抗体活性产品的制备工艺；

本发明提供了上述具有抗体活性产品的应用途径：用上述具有抗体活性的产品配制生物制剂，用于因幽门螺杆菌感染引起的相关疾病的治疗，用于幽门螺杆菌感染的预防。

本发明所提供的上述具有抗体活性产品的特征在于：对幽门螺杆菌菌体具有抗体活性，对幽门螺杆菌细胞毒素具有抗体活性。其中幽门螺杆菌细胞毒素包括但不只包括空泡毒素(VacA)和细胞毒素样蛋白(CagA)。

本发明所提供的上述具有抗体活性产品的制备工艺如下：

1.制备幽门螺杆菌菌体和细胞毒素多价抗原

从幽门螺杆菌感染者病灶部位分离鉴定得到产细胞毒素的幽门螺杆菌菌种，所产的细胞毒素包括但不只包括空泡毒素(VacA)和细胞毒素样蛋白(CagA)。

将上述菌种接种到布氏肉汤培养基中培养72小时，离心分别收集菌体和培养上清，培养上清通过超滤浓缩得到细胞毒素。

将菌体进行杀菌，细胞毒素进行脱毒，按比例混合后，加入等体积的福氏佐剂，乳化混匀，得到幽门螺杆菌菌体和细胞毒素多价抗原。

2.免疫产卵母鸡

选用健康的产卵母鸡隔离饲养，进行鸡肌肉多点注射上述多价联合疫苗，以后每隔两周加强免疫一次，共免疫三次，三周后开始收集鸡卵，4℃储存备用。

3.提取卵黄抗体

上述抗幽门螺杆菌菌体和细胞毒素鸡卵黄抗体的提取采用水稀释法：从收集的免疫鸡卵中分离卵黄，用去离子水稀释，调整适当pH值，4℃静置8小时或过夜，离心取上清浓缩，冷冻干燥，得到上述鸡卵黄抗体。

本发明所提供的上述具有抗体活性产品是通过幽门螺杆菌菌体和细胞毒素免疫产卵母鸡而得，具有特异性，对防治幽门螺杆菌感染引起的相关疾病具有良好的效果。本发明采用母鸡所产卵为载体，安全无毒，易于产业化。

四、具体实施方式

实施例一

具有抗体活性的抗幽门螺杆菌菌体和细胞毒素鸡卵黄抗体产品可以通过以下步骤获得：制备幽门螺杆菌菌体和细胞毒素组成的多价抗原，用此多价抗原免疫健康母鸡，然后收集其所产卵，再从其所产卵中提取抗幽门螺杆菌菌体和细胞毒素鸡卵黄抗体。

实施例二

菌种的制备：从幽门螺杆菌感染者病灶部位分离幽门螺杆菌菌株，采用菌种鉴定系统进行鉴定，得到产细胞毒素的菌种，所产的细胞毒素包括但不只包括空泡毒素(VacA)和细胞毒素样蛋白(CagA)。

实施例三

幽门螺杆菌菌体和细胞毒素多价抗原制备：将上述菌种接种到布氏肉汤培养基中培养72小时，离心分别收集菌体和培养上清，培养上清通过超滤浓缩得到细胞毒素。将菌体进行杀菌，细胞毒素进行脱毒，按比例混合后，加入等体积的福氏佐剂，乳化混匀，得到幽门螺杆菌菌体和细胞毒素多价抗原。

实施例四

免疫产卵母鸡：选用健康的产卵母鸡隔离饲养，进行鸡肌肉多点注射上述多价抗原，以后每隔两周加强免疫一次，共免疫三次，三周后开始收集鸡卵，4℃储存备用。

实施例五

上述抗幽门螺杆菌菌体和细胞毒素鸡卵黄抗体的提取采用水稀释法：从收集的免疫鸡卵中分离卵黄，用去离子水稀释，调整适当pH值，4℃静置8小时或过夜，离心取上清浓缩，冷冻干燥，得到上述鸡卵黄抗体。

实施例六