[发明专利]抗前列腺特异抗原PSA单克隆抗体及应用

说明书

背景技术

前列腺特异抗原(prostate specific antigen，PSA)是与前列腺癌相关的一种抗原，属糖蛋白类物质，MW约为34KD，pH为6.8～7.5，等电点为6.9，半衰期为2.2±0.8天。PSA存在于前列腺内质网和前列腺上皮细胞及分泌物当中，正常前列腺及病变前列腺组织内均含有PSA。它是公认的诊断前列腺癌的较好的肿瘤标志物，其诊断前列腺癌的特异性为82％-97％。前列腺癌在男性所有类型癌中占10％～20％，是男性最常见的癌肿。该病进展缓慢，是威胁50岁以上男性生命的主要癌症，在西方国家占男性死亡率的第二位。流行病学调查表明，随着我国居民生活水平的改善，环境污染的加剧以及饮食结构的改变，前列腺癌的发病率日趋上升，已引起临床上的高度重视。美国FDA已批准将PSA检测作为50岁以上男性的普查指标。研究显示，PSA测定在早期诊断前列腺癌上要优于直肠指检。正常男性的PSA值＜4μg/L。

PSA是Wang等于1979年首先采用免疫沉淀技术从前列腺组织中分离出来的。其主要由前列腺组织上皮细胞分泌，尿道周围腺体也分泌PSA，但后者很少进入血液。PSA为单链糖蛋白，分子量为32～34kD，由237个氨基酸残基组成。编码PSA的mRNA全长为1729bp。PSA为一种中性丝氨酸蛋白激酶，有酶的活性，但活性水平较低，能溶解精液中的蛋白质，在精囊包的分裂和精液的液化上发挥生理作用。PSA能刺激前列腺癌细胞产生活性氧，该效应有浓度依赖性，PSA浓度愈高，刺激作用愈明显，而抗PSA抗体可抑制PSA的刺激作用。Filella X等通过体外研究证实，PSA能明显抑制IL-1β，IL-6以及TNF-α等细胞因子的表达，提示PSA具有免疫调节作用。Sutkowski DM等认为，PSA可调节前列腺fibromuscular细胞生长，其机理是：PSA降解类胰岛素生长因子结合蛋白3(insulin-like growth factor-binding protein-3，IGFBP3)，后者被降解，类胰岛素生长因子I(insulin-like growth factor-1，IGF-1)从IGF-1-IGFBP3复合物中被释放，游离的IGF-1有促进细胞增殖作用。PSA基因的表达受P53的调控，研究表明，P53能抑制PSA启动子的活性，前列腺癌患者PSA水平升高是前列腺组织中的P53的表达(或活性)受抑制或P53突变的结果。黄酮类化合物能抑制前列腺癌细胞分泌PSA。而NF-kB能促进PSA的表达。

无论在正常或是病理状态下，进入血液循环的PSA都很少。PSA在血液中以游离和结合两种形式存在。其中游离PSA(free PSA，f-PSA)只占小部分，结合型(comlexed PSA，c-PSA)占大部分，即与内源性蛋白酶抑制物前列腺癌α1-抗糜蛋白酶(α1-antichymotrysin，ACT)结合成PSA-ACT复合物，以及与另一种蛋白抑制物α2-巨球蛋白(α2-macroglobulin，α2M)结合成PSA-α2M。在精液中，PSA还与C蛋白抑制物构成复合物。由于PSA-α2M不具有免疫活性，不能被现有的PSA检测法检测到，所以目前可定量检测到的PSA有3种：T-PSA，F-PSA，PSA-ACT.

前列腺特异抗原是前列腺疾病价值很高的肿瘤标志，在临床上被广泛应用。PSA可用在前列腺癌的诊断及分期，还可以侦测及追踪治疗效果。PSA虽然是前列腺组织特有的一种蛋白，却不是前列腺癌特有的。许多前列腺的良性疾病，包括前列腺肥大症急性或急慢性前列腺发炎都会使PSA上升，而临床上怀疑有前列腺癌的病人，或多或少也有不同程度的前列腺肥大症，因此如何由PSA区分出前列腺癌和前列腺肥大症也就格外的重要。PSA和肛诊是目前第一线家庭医师或泌尿科医师们筛检早期前列腺癌的重要工具。一般来说，PSA值随着年龄升高，正常值也会逐渐升高，60到69岁以上的人，PSA正常值约小于4.5，70岁到79岁则小于6.5，台大医院测得最高的PSA值是12,000单位，来自一位转移性前列腺癌之病人，但是许多病人的PSA值，比正常参考值稍高却不是很高，如落在6到10之间，因此到底要不要进一步作前列腺切片，以证实得了前列腺癌，是一个麻烦的问题，需要进一步以其它方法验证。PSA的发现代表了前列腺癌研究领域上的重大进步，也使得每年新发现前列腺癌的病例数目大为增加，由于目前仍然没有晚期前列腺癌的根治方法，减少前列腺癌的死亡率，似乎唯有依赖早期发现局限于前列腺内的前列腺癌并给予适当治疗，才能达成。