[发明专利]聚乙二醇修饰的L－门冬酰胺酶

说明书

技术领域

本发明涉及用聚乙二醇修饰药物，尤其涉及用聚乙二醇修饰的蛋白质及其 应用。

背景技术

本发明所涉及的L-门冬酰胺酶(L-asparaginase，L-ASP)广泛存在于微生 物、植物和部分啮齿类动物的血清中，具有较强的抗肿瘤作用。(Abuchow ski A，Theo V S，Palczuk N C，et al.Alteration of immunological properties of Bovine Serum Album in by covalent attachment of polyethylene glycol. J Biol Chem，1977，252：3578)。

L-门冬酰胺酶的活性形式为一同源四聚体，每一亚基由326个氨基酸组成。 L-门冬酰胺是某些肿瘤细胞生长必不可少的氨基酸，对人体正常细胞而言，自 身具有合成L-门冬酰胺的能力，而肿瘤细胞缺乏门冬酰胺合成酶不能自身合成 L-门冬酰胺，其细胞需要摄取外源的L-门冬酰胺才能存活(Dübbers A，Würthwein G，Müller H J.Asparagine synthetase activity in paediatric acute leukaemias1.Br J Haematol，2000，109(2)：247；叶启东，顾龙君. 左旋门冬酰胺酶治疗儿童白血病的研究进展.国外医学输血及血液学分册， 2000，23(6)：3381)。L-门冬酰胺酶能催化水解L-门冬酰胺生成L-门冬氨酸 和氨，因此能够有效地抑制癌细胞的生长，最终使癌细胞消亡。目前在临床上已 被用于儿童急性淋巴细胞白血病(childhood acute lymphoblastic leukemia， ALL)的治疗。L-门冬酰胺酶单独使用时，对ALL的有效率为60％，与长春碱 (vincristine)及皮质甾类药物(corticosteroids)联合使用时，对ALL的有效 率高达95％(Iiboshi Y，Papst P J，Terada N，et al.L-asparaginase inhibits the Rapamycin-targeted signaling pathway[J].Biochem Biophys Res Commun， 1999，260(2)：534)。另外，L-门冬酰胺酶对单细胞白血病、淋巴肉瘤、白血病 性网状内皮组织增多症以及慢性髓细胞白血病也有一定的疗效，对胰腺癌细胞 的增多还有一定的抑制作用[Dübbers A，Wrthwein G，Müller H J. Asparaginase synthetase activity in paediatric acute leukaemias[J].Br J Haematol，2000，109(2)：247]，是临床治疗白血病的重要药物。

但是，由于它来源于微生物，对人而言是一种外源蛋白，有较强的免疫原性， 临床上常见进行性免疫反应和全身性过敏反应，而限制了其临床应用。(张丽 娜，宫道华.江苏医药.左旋门冬酰胺酶治疗小儿急性淋巴细胞性白血病的毒副 反应.2005，31(5)：392；王宁玲，刘芝璋等.左旋门冬酰胺酶治疗儿童白血病的 毒副作用及防治.中国小儿血液，2005，10(3)：133)。

为此，如何获得低免疫原性的L-门冬酰胺酶，改善该蛋白酶的药物动力学 以提高耐受性及给药便利程度，一直是研究的重点。