[发明专利]一种SARS冠状病毒药物靶点及其应用

说明书

背景技术

非典型肺炎(SARS)是由一种新发现的冠状病毒(severe acuterespiratory syndrome associated coronavirus，Nidovirales；Coronaviridae；Coronavirus；Group2species)所引起。病毒的基因组由一条单链RNA组成，其中包含有14个开放式阅读框(ORF)。目前已知病毒编码的蛋白质包括：脂双层膜及其上的棒状膜蛋白S、包膜蛋白E、膜糖蛋白M、以及膜内部衣壳蛋白N，以及一些蛋白酶和复制酶，然而大多数的ORF是否编码蛋白质，以及他们的功能都不清楚(Rota PA，Oberste MS，The genome sequence ofthe ARS-associated coronavirus.Science.2003May30；300(5624)：1399-404)。

ORF3a最近研究比较集中的SARS病毒基因之一。ORF3a编码了一个全长274个氨基酸的全新病毒蛋白，已有研究人员通过免疫印迹和蛋白质质谱的方法证明了这一病毒蛋白的存在，并推测其很可能是病毒的结构蛋白。通过生物信息学分析，该蛋白具有3个跨膜区，与其他已知蛋白的同源性很低(吴家睿，曾嵘等，申请号：200310108604.X)。虽然通过很多不同的实验方法都证明了3a蛋白的存在，但是关于这一蛋白功能的研究还很少，而现有的文献都没有能够阐明该蛋白在病毒周期中的作用。(Naoto lto，Eric C.Mossel，Krishna Narayanan，Vsevolod L.Popov，et al.，Severe acute respiratorysyndrome coronavirus 3a protein is a viral structural protein，2005，J.Virol.79，3182-3186)。同时，也未见有利用其全蛋白或者部分多肽序列作为抗原免疫动物的报道。

目前通常使用的SARS冠状病毒的药物多为中草药制剂和部分类型的干扰素，对SARS病毒的抑制效果不甚理想，且由于是通过药物筛选方法获得，其作用机制和作用的具体靶点不甚明了，为预防和治疗带来了不确定性。

发明内容

所要解决的技术问题

本发明需要解决的技术问题为了克服上述缺陷，提供一种SARS冠状病毒药物靶点、该药物靶点的单克隆抗体和多克隆抗体及其制备方法、以及一种病毒的抑制剂。

技术方案

本发明的技术方案之一是提供一种SARS冠状病毒药物靶点，该药物靶点为ORF3a病毒基因所编码的蛋白质，具有离子通道特性。

上述的SARS冠状病毒药物靶点的一种优选方式为，所说的ORF3a病毒基因与序列表SEQ ID NO：1的碱基序列相同或同源。

上述的SARS冠状病毒药物靶点另一种优选方式为，所说的离子通道的活性可以被钡离子抑制。进一步来说，该离子通道具有单价阳离子强通透的特性。特别的例子是，所说的单价阳离子为钾离子。

上述的SARS冠状病毒药物靶点再一种优选方式为，所说的蛋白质在细胞内通过二硫键的方式形成四聚体。

本发明的技术方案之二为提供一种抗SARS冠状病毒抗体，该抗体特异性地与技术方案之一所说的SARS冠状病毒药物靶点结合。

上述SARS冠状病毒药物靶点的抗体的一种优选方案为，该抗体是SARS冠状病毒药物靶点的多克隆抗体，且由下列制备方法所制备，步骤包括：

(1)提供氨基酸序列为SEQ ID NO：3的多肽；

(2)将多肽与载体蛋白偶连，并与佐剂一起免疫动物；

(3)取动物的抗血清过抗原偶连的亲和层析柱纯化，即得到所述的抗体。

氨基酸序列为SEQ ID NO：3的多肽，是指来源于SEQ ID NO：2即ORF3a基因所编码的蛋白质序列的一段多肽，具体选择方法可以为利用Oligo序列分析软件针对SEQ ID NO：2进行抗原性分析，从而选出抗原性最强的一个多肽片段。

上述的这些抗体制备步骤并不是一成不变的，本领域的普通技术人员可以根据实际情况进行合理的修改使之符合应用要求。比如根据要求选择是否使用载体蛋白进行偶联，是否与佐剂一起免疫动物，以及是否使用亲和纯化方法来纯化抗体等等。

上述SARS冠状病毒药物靶点的抗体的另一种优选方案为，该抗体是SARS冠状病毒药物靶点的单克隆抗体，且由下列制备方法所制备，步骤包括：

(1)提供氨基酸序列为SEQ ID NO：3的多肽；