[发明专利]白花蛇舌草中环烯醚萜类化合物单体的提取、分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物化学领域，具体地说涉及从白花蛇舌草中提取、分离纯度在90％以上的环烯醚萜类化合物单体，即E-6-O-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯的方法。

背景技术

白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Willd.)为茜草科耳草属植物白花蛇舌草的全草，主产分布于广东、广西、福建等地，其化学成分主要为E-6-O-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯等环烯醚萜类、齐墩果酸等三萜类和芦丁等黄酮类。白花蛇舌草以全草入药，具有清热解毒、利尿消肿、活血止痛的功能，广泛用于治疗扁桃体炎、咽喉炎、尿路感染、盆腔炎、阑尾炎、肝炎、菌痢、毒蛇咬伤和肿瘤。但是白花蛇舌草及其制成的各种药品在质量控制方面研究较少；白花蛇舌草药材及其制剂多用定量齐墩果酸作为质量控制的指标；白花蛇舌草注射液用总黄酮(芦丁计)的含量作为质量控制的指标。到目前为止没有报道以白花蛇舌草中含量最高的环烯醚萜类化合物E-6-O-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯作为白花蛇舌草中环烯醚萜类化合物的质量控制的指标。

关于E-6-O-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯制备方法的报道有：0.5Kg白花蛇舌草用甲醇提取、提取液浓缩后加水溶解，先后用氯仿、正丁醇萃取，正丁醇萃取物上硅胶柱层析两次，再上活性碳柱，得到0.97g E-6-O-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯，得率为0.194％(Y.Nishihama et al.，Planta Med.，1981，Vol43，28-33)；另一种方法是吴孔松用40％乙醇提取6Kg白花蛇舌草、提取液浓缩后加水溶解，分别经大孔树脂柱，聚酰胺柱，Sephadex LH-20柱层析，聚酰胺柱，硅胶柱层析，Sephadex LH-20柱层析分离，得到0.48gE-6-O-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯，得率为0.008％(吴孔松，中国药学杂志2005年6月第40卷第11期)。

以上分离方法，均应用三步以上柱层析，且采用大量不易回收利用的有机溶剂，方法繁锁，成本高，产品得率低。

发明内容

本发明目的是提供一种简单可行，成本较低，得率较高且适合工业化从白花蛇舌草中提取、分离纯度在90％以上的环烯醚萜类化合物单体，即E-6-O-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯的方法。

本发明所述的白花蛇舌草中环烯醚萜类化合物单体是指E-6-O-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯(C₂₆H₃₀O₁₃，6-O-p-coumaroyl scandoside methyl ester)，其结构式如下：

本发明所述的一种从白花蛇舌草中提取、分离得纯度为90％以上的环烯醚萜类化合物单体，即E-6-O-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯的方法，该方法包含如下步骤：

(1)将粉碎的白花蛇舌草放到第一醇水溶液中加热回流提取，滤过，浓缩得浸膏(I)，加适量水溶解，滤过，浓缩得浸膏(II)；

(2)步骤(1)浓缩后的浸膏(II)加入第二醇水溶液中溶解，大孔树脂柱分离，用第三醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩，得到初品；

(3)步骤(2)所得到的初品以第四醇水溶液溶解后，用Sephadex LH-20柱层析，用第五醇水溶液梯度洗脱，浓缩，结晶。

本发明所述方法中，步骤(1)中所述第一醇水溶液中醇的体积浓度为30％～95％，白花蛇舌草与提取用第一醇水溶液的重量比为1：1～10，优选比例为1：3～10。提取次数为1～5次，提取时间为0.5～4小时。所述浸膏(I)的相对密度为1.1～1.3(60℃)，浸膏(II)的相对密度为1.1～1.3(60℃)。

本发明步骤(2)中所述大孔树脂柱中使用的大孔树脂可为苯乙烯类树脂、甲基丙烯酸酯类树脂，优选为苯乙烯类树脂。

步骤(2)所述第二醇水溶液中醇的体积浓度为0％～40％；浸膏(II)与第二醇水溶液的重量比为1：1～20；优选为1：2～10；浸膏(II)与大孔树脂的重量比为1：1～6；步骤(2)中醇水溶液洗脱可采用梯度洗脱方式，选脱用的第三醇水溶液中醇的体积浓度为20～100％。

在本发明步骤(3)中溶解初品用的第四醇水溶液中醇的体积浓度为20％～100％；初品与第四醇水溶液的重量比为1：1～8，优选为1：2～4；所述的第五醇水溶液中醇的体积浓度为20％～100％。结晶用第六醇水溶液，第六醇水溶液中醇的体积浓度为20％～95％。

上述第一醇水溶液，第二醇水溶液，第三醇水溶液，第四醇水溶液，第五醇水溶液，第六醇水溶液中所用的醇为甲醇或乙醇。

经本发明所述的方法提取、分离得到的E-6-O-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯，实验证实对肝癌SMMC-7721细胞有抑制效应。