[发明专利]一种快速检测样品中单增李斯特菌的试剂盒

权利要求书

1.一种快速检测样品中单增李斯特菌的试剂盒，其特征是，该试剂盒由以下试剂组成：

试剂A：DNA提取液；

试剂B：PCR引物和探针；

试剂C：PCR反应液，其中含有特定的1对引物：LM1，5’端被地高辛标记的LM2，其序列分别为：5’-GAAAAAGCATTTGCCAT-3’和5’-GCAACTTCCGGCTCAGC-3’；

试剂D：ELISA反应液，其中含有特定的1对引物：5’端被生物素标记的探针LM4和IS5，序列分别为：5’-GGTCAGAGTGAAGCTCATGT-3’和5’-TACGTACTCTCGATCACGTC-3’。

2.根据权利要求1所述的一种快速检测样品中单增李斯特菌的试剂盒，其特征是所述的DNA提取液其组成为50mM NaOH，1M Tris-HCl。

3.根据权利要求1所述的一种快速检测样品中单增李斯特菌的试剂盒，其特征是所述的PCR引物为LM1、LM2，探针为LM4和IS5。

4.根据权利要求1所述的一种快速检测样品中单增李斯特菌的试剂盒，其特征是所述的PCR反应液为每管25μL扩增反应体系组成中含2μL 0.025mol1^-1MgCl₂；0.4μM 1对引物LM1和LM2为1μL；10×PCR buffre 2.5μL；200μMdNTP 1μL；Taq酶0.75U；15U尿嘧啶-DNA糖基化酶；DNA 1μL；ddH₂O15.85μL。

5.根据权利要求4所述的一种快速检测样品中单增李斯特菌的试剂盒，其特征是DNA的终浓度为10～100ng/mL。

6.根据权利要求1所述的一种快速检测样品中单增李斯特菌的试剂盒，其特征是ELISA反应液由以下组成：

结合buffer：10mMTris-HCl，100mMNaCl，1Mmedta，体积比为0.15％TritonX-100，pH7.5；

生物素标记探针LM4、IS5，终浓度为2.5pM；

变性液：125mMNaOH，20mMEDTA；

杂交液：2.5×SSC，2×Denhardt’s solution，10mM Tris-HCl，1mMEDTA，pH7.5；

洗液I：1×SSC，2×Denhardt’s solution，10mM Tris-HCl，1mMEDTA，pH7.5；

抗-DIG-POD：原浓度为150U/mL，用时1∶2000稀释；

洗液II：100mM Tris-HCl，150mM NaCl，体积比为0.05％Tween 20，重量体积比为0.5％blocking reagent，100μg/mL DNA from herring sperm，pH7.5；

显色底物A：0.4mM TMB；

显色底物B：0.02％H₂O₂；

终止液：50mM H₂SO₄。

7.根据权利要求1所述的一种快速检测样品中单增李斯特菌的试剂盒，其特征是试剂C、D中所含的特定引物每种含量应不少于0.4μM。