[发明专利]重组口蹄疫病毒多肽片段及其应用

说明书

技术领域

本发明是关于一种重组口蹄疫病毒多肽片段，特别是关于一种能安全有效地广泛应用于免疫测定、疫苗等领域的重组口蹄疫病毒多肽片段。

背景技术

口蹄疫是一种人畜共患的传染病，在畜类中可传染给所有偶蹄类动物。其致病源为微小核糖核酸病毒属中的Aptho病毒(Apthovirus)，包括七种血清型：O型、A型、C型、SAT1型、SAT2型、SAT3型和亚洲1型。目前在英国流行的为泛亚O型，毒性很强，在动物中该病表现为急性发热，随之在动物的口中和蹄上出现水泡。口蹄疫对畜牧业发展的危害性很大。猪、牛、羊等偶蹄类动物感染上这种疾病，生产性能下降，严重的会引起死亡，幼龄动物的死亡率更高。口蹄疫可由动物传染给人类，儿童感然后可发生严重的心肌炎，是重要的人畜共患病。

随着国际贸易体系的日趋完善，口蹄疫已成为限制活体动物及动物制品贸易的动物性疾病之一。某一国家或地区发生一例口蹄疫，将立即导致形成针对该国家或地区相关产品的贸易壁垒。20世纪90年代初，欧盟在经过了成本效益分析后决定对口蹄疫采取″围堵策略″，即不对牲畜进行针对该病的预防接种。但一旦爆发疫情，将立即禁止发生疫情的国家出口任何活体动物或动物制品。同时在该国禁止偶蹄类动物的迁移，并立即对受感染动物、感染区内动物及与受感染动物有过任何接触的动物进行屠宰和焚烧。

长距离的动物贸易可造成口蹄疫病毒的传播，而疫区附近非疫区动物密度的增加也可造成该地区疫情的爆发。另外，口蹄疫病毒也可借风、人、动物或被污染的车辆的移动而传播。国与国之间口蹄疫的主要传播途径为合法或非法进口感染的活体动物，肉类制品和奶制品。旅客从国外疫区带回的食物也可传播该病。口蹄疫病毒可在新鲜肉制品、半加工肉制品、烟熏肉制品、未治愈动物的肉制品以及巴氏消毒不彻底的奶制品中存活相当长的时间。而且，被感染的动物在临床症状表现前就可分泌病毒颗粒。因此，口蹄疫的危害具有一定的隐蔽性，急需一种有效地手段和工具来及时准确地检测出动物是否患有口蹄疫。

另外，口蹄疫是一种人畜共患的传染病，为了避免给社会造成危害，国家不允许批量生产口蹄疫全病毒的相关产品，因此，全病毒口蹄疫检测试剂盒不能向普通的畜牧业养殖业推广应用，延误了疫情的发现和诊断。另外，全病毒口蹄疫检测试剂盒的制作和保存都需要进行严格的隔离，因此造价昂贵。

如中国专利第03100579号所揭示的一种口蹄疫病毒(FMDV)重组基因表达的蛋白检测罹病牲畜FMDV抗体技术。其中，利用体外重组技术克隆或合成FMD疫苗基因(合成单价、多价多肽疫苗基因、亚单位疫苗基因和非结构蛋白基因等)，使其在一定表达载体系统中高效表达，产生具有免疫原性的蛋白。经免疫印迹分析，其表达蛋白产物能被FMDV阳性血清所识别，显示该蛋白具有免疫学活性，从而可用该重组蛋白作为具有免疫原性的抗原来代替传统的使用病毒转染细胞制备的抗原。

但是，第03100579号专利所揭示的技术所获得的重组基因的制作过程中需要病毒样本的参与，而病毒样本的获取既手续复杂，又容易对研制人员造成感染，从而导致制造成本高，不适于广泛推广；另外，其获得的重组基因在空间上分布简单，不能充分形成立体三维结构，从而导致其抗原性较低。

因此，提供一种安全有效的手段和工具，及时准确地检测出动物是否患有口蹄疫疾病成为业界急需解决的课题。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种能够向终端用户推广应用的、安全有效的重组口蹄疫病毒多肽片段以及由该重组口蹄疫病毒多肽片段所获得的基因产品。

本发明的一种技术方案是：提供一种重组口蹄疫病毒多肽片段，其包括两条或者两条以上寡核苷酸单链片段以及一个或者一个以上柔性氨基酸片段，每两条寡核苷酸单链片段之间通过一个柔性氨基酸片段建立连接，并且至少在其中一条寡核苷酸单链片段中包含口蹄疫病毒基因的核心片段RGD，其中：

寡核苷酸单链片段选自以下片段组的其中之一：

ISISEIKGVIVHKIETILF；

VYNGSSKYGDTSTNNVRGDLQVLAQKAERTLPTSFNYGAIK；

KKKIITITRITIITTID；

SKYGDTSTNNVRGDLQVLAQKAERTLPTSFNYGAIK；

KYGDTSTNNVRGDLQVLAQKAERTL；