[发明专利]新、支、流H9亚型三联灭活疫苗的制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及禽类生物制药技术领域，一种新、支、流H9亚型三联灭活疫苗的制备方法

背景技术：

禽流感于1878年首发于意大利，是有A型正粘病毒引起的病毒性传染病，根据流感病毒血凝素HA和神经氨酸酶NA抗原性的不同，可分成很多亚型，如H5N1、H9N2。本病主要侵害禽的呼吸、消化和泌尿生殖系统，临床主要表现为呼吸症状、产蛋率下降及出现不同程度的死亡，成为危害全球养殖业的第一大疫病，已被国际兽医局OIE定为A类传染病，其传播途径主要是通过水平传播，任何季节和不同日龄的鸡群均可发病；鸡新城疫俗称鸡瘟，是由鸡新城疫病毒引起的一种高度接触性传染病，主要经呼吸道和消化道感染，各种年龄的鸡均可感染，以雏鸡最为严重，发病率和死亡率可达80％以上；鸡传染性支气管炎是由传染性支气管炎病毒引起鸡的一种急性、高度接触性呼吸道疾病，传播途径主要是经呼吸道感染，发病多集中在冬、春季，6周龄死亡率高，可达20％左右。鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、传染性支气管炎三种传染病均对养禽业造成了巨大的损失。

疫苗是将病原微生物，如细菌、立克次氏体、病毒等，及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。疫苗保留了病原菌刺激动物体免疫系统的特性。当动物体接触到这种不具伤害力的病原菌后，免疫系统便会产生一定的保护物质，如免疫激素、活性生理物质、特殊抗体等；当动物再次接触到这种病原菌时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆，制造更多的保护物质来阻止病原菌的伤害。灭活疫苗俗称“死疫苗”，是将病原微生物灭活后使其失去致病能力，但仍保留免疫原性而制成的，进入机体后可直接引起免疫应答，但不能繁殖，比较安全、稳定。具有生产方便，使用安全，易于保存的特点。根据疾病预防控制的长期战略构想，就传统疫苗而言，将会逐渐加大灭活疫苗的分量，减少活疫苗特别是中等毒力活疫苗的使用，由于新的传染病不断出现，疫苗品种越来越多，动物接种疫苗的种类和次数也越来越多，多针次、大剂量、多品种的灭活疫苗反复免疫接种将造成畜禽的应激反应，过敏反应，影响生产性能。同时，多次接种会增加劳动强度，加大生产成本。

浓缩可提高免疫抗原在疫苗终产品的浓度，常用的浓缩方法有离心沉淀法、氢氧化铝吸附沉淀法和羧甲基纤维沉淀法，但上述几种方法均有其缺点灭活的方法包括物理方法和化学方法。物理法如加热、射线照射等方法，化学法是用化学灭活剂进行的，是目前常用的灭活方法。常用的灭活剂有甲醛、乙酰乙烯基亚胺、乙烯亚胺、β-丙酸内酯等。甲醛的灭活原理是它能使微生物的蛋白质、核酸变性，导致死亡，但不明显影响其免疫原性

佐剂属于免疫增强剂中的一类，单独使用时一般没有免疫原性，与抗原物质合并使用时，能增强抗原物质的免疫原性，增强机体的免疫应答，或者改变机体免疫应答类型。选择佐剂的同时应考虑其免疫增强作用和安全性。生物制品的佐剂，应符合以下条件：一是无致癌性和辅助致癌作用；二是无毒性；三是吸附力强、易于吸收；四是不含与机体有交叉免疫反应的物质，本身不引起机体的超敏反应，也不会与机体自身物质结合引起不良反应导致损伤；五是能经1～2年保存不变质、不明显降低效力、不出现不良反应。佐剂的类型一般由氢氧化铝胶、弗氏佐剂、白油佐剂、矿物油、水花生油乳剂、吐温-80、司盘、左旋咪唑、脂质体等，与抗原混合成悬浊状态，尽可能延长在注射部位的贮留时间，从而持续不断地刺激机体免疫系统，以产生较强的免疫应答；可出现免疫增强的作用。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种新、支、流H9亚型三联灭活疫苗的制备方法，以实现多联疫苗预防，达到一针防多病的目的，大力发展养殖业，造福于人类。

为了实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

该新、支、流H9亚型三联灭活疫苗的制备方法，采用NDVLaSota株病毒液含量为10～22％；IBVM41株病毒液含量也为10～22％；AIVHL株毒液含量为8～15％；经浓缩、灭活方法；加入佐剂白油，免疫助剂吐温、司本、硬脂酸铝制成联苗。

该新、支、流H9亚型三联灭活疫苗的制备方法，其浓缩方法中采用纤维膜超滤浓缩法，本方法可是使效价大幅提高.

该新、支、流H9亚型三联灭活疫苗的制备方法，其灭活方法中NDVLaSota株病毒液与AIVHL株病毒液用0.05～0.15％甲醛溶液，35～38℃，灭活12～17小时；IBVM41株病毒液采用2-8℃低温灭活，120-145小时，可彻底灭活病毒，而且不影响其免疫原性。