[发明专利]测定萝芙木属植物中利血平含量的高效液相色谱方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种色谱分析方法，具体要求保护的是一种测定萝芙木属植物中有效成分利血平(reserpine)含量的高效液相色谱方法。

二、背景技术

利血平是从夹竹桃科萝芙木属(Rauvolfia)植物的根中提取的，具有降血压作用的天然药物，主要制剂有“利血平片”、“利血平注射液”、“复方降压片”等，利血平的结构式如下：

由于结构复杂，化学合成成本高，利血平目前依靠从萝芙木属植物中提取，资源以云南萝芙木R.yunnanensis、催吐萝芙木R.vomitoria为主。由于多年采挖导致资源枯竭，人工种植正在兴起。对萝芙木中利血平的含量分析研究很少，有报道用纸色谱电泳或纤维素色谱分离利血平色带后用分光光度法测定含量，但操作烦琐，误差大。建立萝芙木中利血平的先进分析方法，以准确掌握品种选育、栽培种植、提取加工等过程中有效成分利血平的变化，是萝芙木产业开发的关键性技术。

三、发明内容

本发明的目的是提供一种准确测定并控制萝芙木属植物中利血平含量的高效液相色谱方法。本发明通过以下技术方法实现：(1)色谱柱以碳十八烷基键合硅胶为填充剂；(2)流动相为乙腈、甲醇、0.01％三乙胺水溶液组成的混合溶剂，其组成的体积比例为乙腈45％～35％、甲醇10％～25％、三乙胺水溶液45％～40％；(3)检测波长268nm，柱温40℃，流速1ml/min，进样体积20ul。

本发明的有益效果在于：(1)经过系统的比较研究，首次建立了测定萝芙木属植物中利血平含量的高效液相色谱方法；(2)方法具有分离效果好，测定准确，灵敏高，专属性强、分析简便快速等技术特点；(3)分析快速，萝芙木各成分吸收峰可在40分钟内全部流出色谱柱；(4)该方法对准确掌握品种选育、栽培种植优化、提取加工等过程中有效成分利血平的变化，有直接的应用价值。

四、附图说明

图1是本发明中利血平标样的HPLC色谱图。

图2是本发明中萝芙木药材样品的HPLC色谱图。

图3是利血平标样在HPLC流动相中的紫外吸收光谱图。

图4是利血平标样在甲醇中的紫外吸收光谱图。

五、具体实施方式

下面的具体实施例进一步说明本发明，但并不构成对本发明权利要求所保护的范围的限制。其工作原理和过程为：萝芙木的提取液注入高效液相色谱仪，由乙腈-甲醇-0.01％三乙胺组成的流动相载着利血平等成分进入色谱柱，以碳十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱将利血平和其它化学成分分离，使它们依次到达紫外检测器并被识别；检测器测定萝芙木样品中利血平峰的响应值，分别对应其进量的多少，通过其响应值的大小和利血平标样的比较来计算萝芙木样品中利血平的含量。

1、色谱柱的选用

考虑到应用的普遍性，选用HPLC测定最常用的碳十八烷基键合硅胶柱。比较了Phenomenex公司Luna C-18柱、Merck公司STAR RP-18柱、Agilent公司XDB-C18柱、大连依利特公司C-18柱、江苏汉邦公司C-18柱等，均有较好分离效果。

2、检测波长确定

取利血平标样用甲醇、HPLC流动相溶解后测定紫外光谱(图3、图4)，具有一致的紫外吸收曲线，有三个主要吸收带。其中218nm的吸收最大但接近末端吸收区域，292nm是肩峰，均不利于测定；268nm处的吸收大且吸收峰较平坦，故检测波长选用268nm。

3、流动相的选用

利血平结构复杂，选择适当的流动相以得到良好的分离效果是分析方法的关键。我们选择甲醇-水、乙腈-水等流动相系统对比筛选，均无很好分离效果。根据峰型变化趋势，将流动相调整为甲醇-乙腈-三乙胺水溶液混合溶剂，具有较好的分离效果，部分试验结果见表1。

表1 流动相对比筛选试验的部分数据