[发明专利]从罗汉果植株提取生物活性组分的方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然物质的生物活性成分，具体而言涉及以罗汉果植株生物活性组分的提取方法。

背景技术

罗汉果植株为葫芦科多年生宿根攀援藤本植物罗汉果(Momordicagrosvenori)，罗汉果主要栽培在中国的广西北部，在华南、贵州、江西以及其它许多地区都有分布，已有300多年的种植、应用历史，其果有“东方神果”之称。中医药学认为，罗汉果甘、酸，性凉，有清热凉血、生津止咳、滑肠排毒、嫩肤益颜、润肺化痰等功效，可用于益寿延年、驻颜悦色及治疗痰热咳嗽、咽喉肿痛、大便秘结、消渴烦躁诸症。从上世纪的50年代开始，对罗汉果的果实进行了很多活性成分的研究，通过这些研究，分离并鉴定了罗汉果的果实中的很强的甜味成分，即罗汉果苷(I到VI)。罗汉果苷为三萜类化合物，其葡萄糖环与mogrol基相连。对罗汉果果实的生物活性研究报道中有关罗汉果苷的一篇专利指出罗汉果苷，特别是罗汉果苷V具有抗口腔微生物的活性(美国专利US Patent 6 319 523)。然而，对于此罗汉果苷的抗微生物活性却没有相关科学文献的报道证实。

罗汉果的果实通常是在秋末进行采摘，与此同时，罗汉果植株的藤就被砍掉，叶和藤被丢弃。其根仍埋在土里，土壤保护其过冬。目前人们对罗汉果植株的非果实部分几乎没有多少研究，其叶和藤也从未加以利用，对于其植株非果实部分的生物活性及利用人们知之甚少，也没有从其中得到的任何有活性的提取物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从罗汉果植株提取生物活性组分的方法。

发明人在罗汉果植株中研究发现了具有抗微生物活性的有效成分，而该有效成分不是人们已知的只存在于罗汉果果实中的罗汉果苷；所发现的抗微生物活性成分存在于罗汉果叶、藤、根、茎和果实中，最强的抗微生物活性部位为罗汉果叶、藤、根、茎和果实提取物的非极性部分。这些抗微生物活性主要表现在抗口腔微生物的活性，比如说导致龋齿的链球菌，牙龈卟啉单胞菌和假丝酵母等。发明人预测到罗汉果植株的抗微生物活性可利用来制备抗微生物的提取物和药物(比如说止咳糖浆，治疗咽喉肿痛的药物，牙膏和漱口液等)，这将会有很大的实用价值和经济价值。

为了将这一发现造福于人类，发明人对从罗汉果植株提取抗微生物活性有效成分的工艺进行了探索。经过反复研究、试验，发明了从罗汉果叶、藤、根、茎和果实中提取、分离、纯化抗微生物生物活性物质的方法。所发明的方法是从罗汉果植株中的实验室和工业化规模的通过柱层析的步骤提取具有抗微生物生物活性物质。其具体方法包括：

①将事先晒干的罗汉果植株的各个部分即叶、藤、根、茎和果实进行机械粉碎得到粗粉，或将新鲜的罗汉果植株的叶、藤、根、茎和果实压碎得到湿的碎块，用清水、或50％的乙醇水溶液、或50％的甲醇水溶液浸泡所述粗粉和碎块，并加热到至少50℃，进行30min以上的提取，得到提取物液；

②将提取混合物过滤，滤液在室温下通过大孔吸附树脂以层析方法进行分离，大孔吸附树脂柱在经水洗去未吸附的物质后用清水、再用10％％到100％的乙醇进行梯度洗脱或甲醇水溶液梯度洗脱；分别收集30％和60％到100％的洗脱液，即得到所需的活性部分；或将提取混合物过滤，滤液通过硅胶柱层析分离，通过氯仿/乙醇/水梯度洗脱或氯仿/甲醇/水进行梯度洗脱收集得到活性部分；

③将滤液干燥得到活性罗汉果植株的粗提物，此粗提物含有抗微生物活性的有效组分。

上述用来进行分离的大孔吸附树脂和硅胶包括市售的各种孔径和型号的树脂和硅胶，如Amberlite XAD系列及山东鲁抗医药股份有限公司的DM系列的大孔吸附树脂等。

本发明首次发现并提供了从罗汉果叶，藤，根，茎和果实中提取、分离、纯化具有抗微生物的活性物质的方法，由于罗汉果的叶、茎、藤、根过去是废弃的，因此利用罗汉果的植株来开发制备抗微生物的提取物，并使之应用于药物及功能性食品、日用品及食品添加剂等将会有很大的实用价值和经济价值。

具体实施方式

实施例1100g罗汉果叶研磨粉碎后在500ml水中煮沸30min进行提取，提取重复3次。将提取液过滤得到滤液约1200ml。滤液干燥得到7g的活性罗汉果叶粗提物，此粗提物含有一定的抗微生物的活性的有效组分。