[发明专利]一种大肠杆菌表达的重组人白介素－11的高效精纯化方法

权利要求书

1.一种大肠杆菌表达的重组人白介素-11的高效精纯化方法，其特征在于：它是对融合蛋白羟胺切割液进行处理，步骤如下：

(1)融合蛋白羟胺切割液经过葡聚糖凝胶G-25(Sephadex G-25)脱盐柱脱盐，得切后脱盐液；

(2)脱盐液依次通过阴离子交换层析柱与阳离子交换层析柱串联层析系统，截留未被切开的融合蛋白及大量的杂质；

(3)采用Gly-NaOH(甘氨酸-氢氧化钠)缓冲液对串联柱进行平衡，使融合蛋白吸附到阴离子交换层析柱上，目标蛋白吸附到阳离子交换层析柱上；

(4)采用添加了NaCl的Gly-NaOH(甘氨酸-氢氧化钠)缓冲液中对进行了步骤(3)处理后的阳离子交换层析柱进行洗脱，使目的蛋白穿出阳离子交换层析柱，收集洗脱蛋白液；

(5)洗脱蛋白液经过葡聚糖凝胶G-25(Sephadex G-25)脱盐柱脱盐去除Na⁺、Cl^-，得到高纯度的蛋白样品；

上述步骤(2)中的阴离子交换层析柱的层析介质包括琼脂糖凝胶(Sepharose)类或聚苯乙烯(SOURCE)类，配基包括季铵基Q或二乙基氨乙基DEAE；

上述步骤(2)和步骤(4)中的阳离子交换层析柱的层析介质包括琼脂糖凝胶(Sepharose)类或聚苯乙烯(SOURCE)类，配基包括磺甲基S或磺丙基SP或羧甲基CM。

2.根据权利要求1所述的大肠杆菌表达的重组人白介素-11的高效精纯化方法，其特征在于：所述步骤(2)中所述的脱盐液连续通过阴离子交换层析柱和阳离子交换层析柱串联层析系统。

3.根据权利要求1或2所述的大肠杆菌表达的重组人白介素-11的高效精纯化方法，其特征在于：所述步骤(2)中所述的脱盐液通过阴离子交换层析柱之后收集，再集中通过阳离子交换层析柱。

4.根据权利要求1或2所述的大肠杆菌表达的重组人白介素-11的高效精纯化方法，其特征在于：所述步骤(3)和步骤(4)中所述的Gly-NaOH(甘氨酸-氢氧化钠)缓冲液的pH值为6.0-11.0，浓度为0.1mol/L-1.0mol/L。

5.根据权利要求3所述的大肠杆菌表达的重组人白介素-11的高效精纯化方法，其特征在于：所述步骤(3)和步骤(4)中所述的Gly-NaOH(甘氨酸-氢氧化钠)缓冲液的pH值为6.0-11.0，浓度为0.1mol/L-1.0mol/L。

6.根据权利要求5所述的大肠杆菌表达的重组人白介素-11的高效精纯化方法，其特征在于，所述步骤(4)中的添加了NaCl的Gly-NaOH(甘氨酸-氢氧化钠)缓冲液中NaCl的浓度为：0.2mol/L-1.0mol/L。

7.根据权利要求1或2所述的大肠杆菌表达的重组人白介素-11的高效精纯化方法，其特征在于：所述步骤(4)中的添加了NaCl的Gly-NaOH(甘氨酸-氢氧化钠)缓冲液中NaCl的浓度为：0.2mol/L-1.0mol/L。

8.根据权利要求3所述的大肠杆菌表达的重组人白介素-11的高效精纯化方法，其特征在于：所述步骤(4)中的添加了NaCl的Gly-NaOH(甘氨酸-氢氧化钠)缓冲液中NaCl的浓度为：0.2mol/L-1.0mol/L。