[发明专利]一种蟾毒配基提取物及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种从蟾皮或蟾酥中提取得到的蟾毒配基提取物及其制备方法与应用。

背景技术

蟾蜍属动物有250多种，分布于世界各地。我国有近10种，主要分布的3种分别是：大蟾蜍华西亚种(Bufo bufo andrewsi Schmidt)、大蟾蜍中华亚种(Bufo bufo gargarizans Cantor)以及黑眶蟾蜍(Bufo melanostitus Schneider)。蟾蜍之名首载于《名医别录》，早在《神农本草经》就载有“虾蟆”的性味与主治。《本草蒙筌》：“味辛、气凉、微毒”，《本草再新》：入心、肝、脾、肺四经。古今验方广泛应用蟾蜍拔毒消肿、定痛杀虫、强心利尿。

以蟾蜍为基原的常用中药材有蟾酥、蟾皮、干蟾，其化学成分相当复杂，按溶解性可分为脂溶性甾族类(蟾毒配基类、蟾蜍毒素类)、水溶性吲哚生物碱类(如5-羟色胺，蟾蜍色胺、蟾蜍噻咛等)。

蟾毒配基属乙型强心甾族类化合物，在C₁₇上接有一个A-吡喃酮基，又名蟾蜍二烯类酯(Bufodienolide)，主要存在于蟾蜍耳后腺及皮肽腺的分泌物中，现已知有20余种，例如蟾毒灵(bufalin)、日蟾毒它灵(gamabufotalin)、蟾毒它灵(bufotalin)、华蟾毒精(cinobufagin)、脂蟾毒配基(resibufogenin)等【江成亮、竺叶青，蟾蜍抗肿瘤作用研究进展，天然产物研究与开发，2000.12(1)，67～72】。

已经有大量文献报道华蟾毒精、蟾毒灵、脂蟾毒配基等具有强心、抗肿瘤等作用【森下倍一，华蟾毒配基及含蟾酥制剂等对开胸豚鼠的强心作用，国外医学.中医中药分册，1987，9(2)：42；JingYetal，Selective inhibitory effect of bufalin on growth of human tumor invitro：association with the induction of apotosis in leukemia HL-60Cell.Jpn.J.CancerRes.1994，85：645；王传社，李燕燕等，脂蟾毒配基对人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用，北京中医药大学学报，2006.29(3)：184-187；金向群，蟾蜍化学与药理作用的研究进展，中草药，1996.27(4)：246-248】

然而，目前的蟾蜍制剂，例如蟾酥镇痛膏、蟾酥注射液、华蟾素注射液和复方蟾皮胶囊等都仍然是以粗提取物入药，成分极为复杂，除含有蟾毒配基、蟾蜍毒素、吲哚类生物碱(如5-羟色胺，蟾蜍色胺、蟾蜍噻咛等)外，还含有氨基酸、还原糖、甾类、肽类等多种类型的化学成分。因此，在临床使用中，蟾蜍制剂具有以下两个主要缺点：①对肿瘤细胞的杀伤率低，②出现过敏反应，血管刺激症状，消化道和心脏毒性等不良反应的发生率高，这都是由于未能去除无效、不良反应成分，未能对真正的有效的成份进行控制造成的。

本申请人经过深入研究，从蟾蜍中提取分离得到一种蟾毒配基提取物，其提取方法简单方便、适合于工业化生产，该提取物的抗肿瘤活性明显增强，克服了蟾蜍制剂存在的缺陷。

发明内容

本发明提供了一种蟾毒配基提取物，蟾毒配基(以华蟾毒精计)在该提取物中的重量百分含量为55％-100％，优选为80％-100％，更优选为90％-100％。

所说的蟾毒配基中含有华蟾毒精、脂蟾毒配基，其在该提取物中的重量百分含量分别为15％～25％。

蟾毒配基中还含有沙蟾毒精、远华蟾毒精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵和蟾毒灵等。

蟾毒配基提取物的含量可以采用常规的测定方法，但是优选本发明所提供的方法：以华蟾毒精(或脂蟾毒配基)计，用紫外分光光度法，在300nM下进行测定。或以华蟾毒精及脂蟾毒配基为对照品，用HPLC法测定(用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.5％磷酸二氢钾溶液-乙腈(50∶50)为流动相；检测波长为296nm；柱温40℃)，面积归一化法计算含量。

本发明还提供了蟾毒配基提取物的制备方法：蟾酥、蟾皮或干蟾用乙醇提取，回收乙醇后浓缩液上大孔树脂柱，先用水及低浓度的醇洗脱，再用高浓度的醇洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，干燥后或经萃取后即得。

其中所说的低浓度乙醇是指10-50％的乙醇，优选为30-40％；所说的高浓度乙醇是指60-100％的乙醇，优选为70-100％。