[发明专利]肿瘤血清标志物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种血清标志物及其应用，尤其涉及一种肿瘤血清标志物及其应用。

背景技术

肿瘤标记物是指肿瘤细胞直接合成和分泌的肿瘤相关抗原、活性蛋白、激素、受体、酶或同工酶，它们当中的一些可以通过循环进入血液或体液。血液和体液中的肿瘤标志物可通过生物化学反应、放免法、酶免法、电化学发光等方法检测出来。

发现肿瘤标记物对肿瘤诊断、治疗、监测复发、判断疗效和抗癌药物设计有十分重要的意义。当前，医院通常使用的肿瘤标记物多达数十种，如血清中的AFP(甲胎蛋白)、CEA(癌胚抗原)、CA125(糖类抗原125)、CA199(糖类抗原199)、CA153(糖类抗原153)、CA50(糖类抗原50)、CA242(糖类抗原242)、CA72-4(糖类抗原72-4)、NSE(神经原特异性烯醇化酶)、SCC(鳞癌相关抗原)、HTG(甲状腺球蛋白)、TPS(组织多肽特异性抗原)、PSA(前列腺特异抗原)、fPSA(游离前列腺特异抗原)、cPSA(结合型前列腺特异抗原)、FT3(三碘甲状腺原氨酸)、FT4(甲状腺素)、TSH(促甲状腺素)、CT(降钙素)、PTH(甲状旁腺素)、β-HCG(绒毛膜促性腺激素)、E2(雌二醇)、P(孕酮)、LH(黄体生成素)、FSH(促卵泡生成素)、PRL(催乳素)、GH(生长激素)、ACTH(促肾上腺皮质激素)、VMA(尿香草扁桃酸)等，但这些标记物的特异性和识别范围并不十分理想，肿瘤的不同时期和肿瘤细胞的类型差别会出现不同的预后结果。在肿瘤检测中，由于单项肿瘤标志物敏感性和特异性不能满足临床诊断的需要，通常采用有针对性的联合检测才能为临床诊断提供有价值的数据；例如，检测肝癌时通常联合检测AFP、CEA、SF和CA199，检测大肠癌时测CEA、SF、CA199和CA50，检测卵巢癌时测CEA、AFP和CA125，检测肺癌时测CEA、CA50和CY211，检测乳腺癌时测CEA、SF、CA153和CA50，检测前列腺癌时测PSA和FPSA。这样势必导致患者为获得对临床诊断有意义的数据需要检测多项生理指标，而检查这些指标时通常需付千元以上的检测费，对患者本人和社会均带来很大的负担。所以，研发新的检测范围更加广泛的肿瘤标志物是当前许多著名研究机构和制药企业的重点研究课题。

近期的研究发现肽基精氨酸脱亚胺酶4(Peptidylarginine deiminase 4，PAD4或PADI4)是类风湿性关节炎的关联基因，其编码的酶在该病发病过程发挥非常重要的作用。PADI4可以在钙离子存在的情况下对其它一些蛋白进行翻译后修饰，将肽中精氨酸转化成瓜氨酸(citrulline)，此过程称之为瓜氨酸化(citrullination)。许多研究证明类风湿性关节炎关节滑膜与肿瘤在组织学上有很多相似性，包括纤维蛋白大量沉淀、细胞异常增殖和分化、毛细血管过量增生和高凝血活性，但这两种疾病在分子水平上的内在联系还不清楚。

申请人用免疫组织化学法对含有48种癌组织204个标本的组织芯片进行了检测，发现PADI4在许多种癌组织特别是各器官的腺癌癌细胞中有非常明显的表达，但该基因在健康组织和非肿瘤病变组织中均无明显表达。申请人进一步用Western blot法对许多肿瘤组织进行了检测，实验结果证实了以上免疫组化的发现。这是首次发现PADI4特异地表达于多种肿瘤组织，其相关研究成果已发表在美国《Molecular Carcinogenesis》(2006；45：183-196)上，并申报了中国国家发明专利(公开号CN1712964A)。

在以上研究基础之上，申请人又制备了4个针对PADI4不同氨基酸片段的多克隆抗体，利用免疫组织化学对表达PADI4的肿瘤组织做进一步细致的观察和分析。通过对山东各地区医院病理科提供的1000余例术后组织标本进行分析，发现PADI4只在恶性肿瘤组织中广泛表达；而在各类良性肿瘤(例如乳腺纤维瘤、肌瘤)和一般炎症组织(如胃炎、胃溃疡、肠炎、前列腺增生)中，PADI4只在一些组织的部分间充质细胞和腺体内皮细胞中表达。同时，我们还发现PADI4在一些临床诊断上未确诊疑似肿瘤标本中有大量表达。