[发明专利]类风湿性关节炎关节滑液标志物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种类风湿性关节炎关节滑液，尤其是一种类风湿性关节炎关节滑液标志物及其应用。

背景技术

类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis，RA)是一种病因尚完全未明了的慢性系统性炎症，多发于手、腕、足等小关节，呈对称分布，反复发作。该病早期表现为关节红、肿、热、痛和功能障碍，晚期关节出现不同程度的僵硬、畸形，并伴有骨骼肌的萎缩，极易致残。在组织病理学方面，类风湿性关节炎主要发生在关节滑膜，并累及关节软骨、骨组织、关节韧带和肌腱。类风湿性关节炎是一种自身免疫疾病，临床诊断该病时通常都是检测患者血液和关节液中是否含有自身免疫抗体，包括类风湿因子，抗微丝蛋白抗体，抗角蛋白抗体，抗核周因子和抗环瓜氨酸抗体。但是，自身免疫抗体的产生往往缺乏特异性，同时灵敏性也不高，比如类风湿因子在类风湿患者中的检出率只有70％多，且类风湿因子在全身性红斑性狼疮、干燥症、硬皮症和皮肌炎等病人的血液中也普遍存在，也经常出现于其它慢性炎症病人血液中，包括慢性肝炎、肿瘤、结核病、亚急性细菌性心内膜炎等。因此，发现新的类风湿性关节炎特异性标志物尤其是抗原性标志物，对及时有效地诊断该病有重要意义。

申请人的研究以及其它许多研究都发现肽基精氨酸脱亚胺酶4(Peptidylargininedeiminase 4，PAD4或PADI4)是类风湿性关节炎的关联基因，其编码的酶在该病发病过程发挥非常重要的作用。PADI4可以在钙离子存在的情况下对其它一些蛋白进行翻译后修饰，将肽中精氨酸转化成瓜氨酸(citrulline)，此过程称之为瓜氨酸化(citrullination)。申请人以前的研究曾证实：①PADI4在类风湿性关节炎滑膜组织里大量表达，②并可能通过瓜氨酸化纤维连接蛋白和抗凝血酶刺激滑膜组织毛细血管增生和纤维蛋白大量沉淀，③瓜氨酸化纤维连接蛋白和抗凝血酶特异地存在于类风湿性关节炎患者血清中。该研究结果发表在包括《自然》、《风湿病学》等国际著名杂志上(见参考文献1-5)，瓜氨酸化抗凝血酶和瓜氨酸化纤维连接蛋白作为类风湿性关节炎抗原性标记物及其测定方法已申请日本和中国国家发明专利(见参考文献6-8)。上述发现对及时有效地诊断类风湿性关节炎具有重要意义。临床医生通过检测类风湿性关节炎患者血液中瓜氨酸化纤维连接蛋白表达水平和瓜氨酸化抗凝血酶表达，可以快速、方便地实现对类风湿性关节炎的准确诊断，同时有效地弥补了类风湿因子等自我免疫抗体疾病特异性低的缺陷。

但是，以上工作未明确表明瓜氨酸化抗凝血酶和瓜氨酸化纤维连接蛋白是否存在于类风湿性关节炎关节滑液中，而临床上为了早期诊断或明确诊断该病经常需要检测关节滑液，因此有必要建立一种利用类风湿性关节炎关节滑液实现对类风湿性关节炎快速、有效诊断的方法，在方法建立中类风湿性关节炎关节液标志物的确立是关键，鉴于我们以前已发现PADI4在类风湿性关节炎关节滑膜组织中有大量表达，是不是PADI4在该病关节滑液中也有表达？若有PADI4表达，该表达是否具有类风湿性关节炎特异性？PADI4表达又能否确立为类风湿性关节炎关节滑液标志物？经检索，还未见相关的报道。

发明内容

针对类风湿性关节炎现有常用诊断技术的不足，本发明要解决的问题是：在研究肽基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)对类风湿性关节炎病理作用及作用机制的基础上提出一种类风湿性关节炎关节滑液标志物及其在制备检测类风湿性关节炎的临床诊断试剂或试剂盒中的应用。

本发明所述的类风湿性关节炎关节滑液标志物，由肽基精氨酸脱亚胺酶4(Peptidylarginine deiminase 4，PAD4或PADI4)组成。

确定和支持上述类风湿性关节炎关节液标志物是肽基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)的实验证据：