[发明专利]肿瘤免疫增效载体pBVIM的构建与表达

说明书

技术领域：

本发明涉及基因工程和免疫学等多个领域，具体地说包括具有免疫增效功能的表达载体pBVIM及其构建与表达，该载体主要用于表达肿瘤特异性抗原，在肿瘤疫苗和肿瘤免疫治疗中发挥功效。

背景技术：

恶性肿瘤是当今世界严重威胁人类健康的致命杀手。目前，外科手术虽能有效切除肉眼所见的肿瘤，但无法保证所有的肿瘤细胞都被切除，也不能改变肿瘤发生的内环境；放疗和化疗除了有严重的毒副作用外，许多肿瘤对其不敏感或产生抗性。此外，肿瘤的复发和转移是影响病人预后的重要因素，也是恶性肿瘤发生和演进中最危险的阶段，它涉及一系列复杂、多步骤的变化，使目前治疗方法都存在很大的局限性。肿瘤疫苗，由于能够激发机体免疫系统，重建正常的免疫预警功能，对于预防肿瘤的复发，有着非同寻常的作用，提高肿瘤抗原/细胞的免疫原性，制备高效的治疗性肿瘤疫苗已成为肿瘤免疫治疗的研究前沿[NestleFO，Tonel G，Farkas A.PLoS Med.2005 Oct；2(10)：e339]。

肿瘤免疫逃逸是肿瘤疫苗研究中的难点，机体无法实现有效的抗肿瘤免疫应答，其主要原因是肿瘤细胞的抗原性弱或缺乏有效的免疫递呈机制，肿瘤细胞表面的MHC抗原和协同刺激分子表达减少或缺如，肿瘤抗原呈递细胞加工处理抗原能力不足，T细胞表面的协同刺激分子丧失等原因，导致肿瘤细胞逃避免疫系统的监测，是肿瘤发生和发展的免疫学基础。所以很有必要在研制肿瘤疫苗中引入免疫增效机制。将多种免疫学机制和多种疫苗形式有机地融合到一起，才有可能使多种作用机制协同发挥作用，最大程度地增强肿瘤疫苗的免疫保护效果[Kaplan JM.Drugs Today(Barc).2004 Nov；40(11)：913-929]。

本研究拟在近年来免疫活性分子研究进展的基础上，选择一些对免疫细胞有激活作用的活性小分子，利用其基因构建表达载体，能够和肿瘤抗原基因进行融合表达。获得的嵌合抗原在肿瘤抗原的基础上，又增加了免疫活性分子的一些免疫特性，既增强了肿瘤抗原的免疫原性，又能促进机体对肿瘤抗原的呈递和识别能力。全面提升表达抗原的免疫活性，创造合适的免疫微环境，有利于打破肿瘤自身免疫耐受，实现抗肿瘤的免疫治疗。

次级淋巴组织趋化因子Secondary lymphoid chemokine(SLC)是人们最近发现的一种起源于内皮细胞的CC型趋化因子，是一种小分子蛋白质，对机体内T淋巴细胞和树突状细胞DC有极高效的趋化作用[Gunn MD，Tangemann K，Tam C，Cyster JG，et al.Proc Natl Acad Sci U S A.1998 Jan 6；95(1)：258-263]。Nagira等人于1997年首先发现了这一新的因子，随后人们在确定了其基因序列的基础上成功地将其在真核及原核系统中加以表达并纯化[Nagira M，Imai T，Hieshima K，et al.J Biol Chem.1997 Aug 1；272(31)：19518-19524.Nagira M，Imai T，Yoshida R，et al.Eur J Immunol.1998 May；28(5)：1516-1523.王东宁，李明峰，曾而良等，2001第17卷 第4期：392-395]。

研究已表明SLC由134个氨基酸残基组成，其中23个氨基酸为信号肽序列。111个氨基酸的成熟肽含有4个半胱氨酸残基，与其他人类CC型趋化因子有21％～33％的同源性，然而这种新型的趋化因子只能特异地趋化淋巴细胞。