[发明专利]一种发夹RNA及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种发夹RNA及其用途，更具体地说是一种能有效抑制HER-2基因表达的发夹状小干涉RNA及其在治疗HER-2阳性肿瘤中的用途。

背景技术

人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2，HER-2/c-erbB-2/neu)基因位于染色体17q21，编码产物是一个具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜糖蛋白p185HER-2，该受体蛋白是表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)或HER家族中的一个重要成员，该家族还包括HER-1(EGFR，erbB-1)、HER-3(erbB-3)、HER-4(erbB-4)。EGFR家族成员与特定配体结合后，受体之间可以形成同源二聚体或异源二聚体，受体二聚化可诱导酪氨酸蛋白激酶活化，使受体C末端酪氨酸残基发生自身磷酸化，然后激活细胞内一系列信号传导通路，刺激细胞增殖、发育、分化、迁移及肿瘤形成等。目前HER-2的配体还不清楚，但当HER-2家族的其它成员与其相应的配体结合后，可优先与HER-2形成异源二聚体，并且HER-2异源二聚体更稳定，引起的传导信号更强。与其它HER成员不同的是，HER-2在缺乏配体激活的情况下仍可形成同源二聚体，激活其自身的酪氨酸蛋白激酶活性，进而激活受体介导的信号传导通路。

在人类中，HER-2多通过野生型基因的扩增和过表达激活。之后，通过这些信号传导通路影响细胞的增殖、分化、迁移、粘附、转化、存活和凋亡。HER-2的高表达将导致细胞增殖速度加快、细胞周期加速、恶性表现增强，并出现抗凋亡及对多种化疗药物产生耐药等现象。HER-2在乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌、肺癌等多种恶性肿瘤中扩增或过度表达，而在正常人体腔上皮、腺上皮和胚胎中的表达水平很低。约30％的乳腺癌、卵巢癌存在HER-2的过表达。HER-2的过表达与乳腺癌的发生、发展、转移和预后不良密切相关。化疗、放疗、内分泌治疗及联合治疗对HER-2过表达的乳腺癌患者无显著疗效，且预后不良。因此，抑制HER-2的过表达有望成为肿瘤治疗和改善预后的有效方法。

近年来，HER-2已成为乳腺癌防治研究的热点之一，被认为是一个判断乳腺癌预后的独立标志物和治疗靶点。人源化单克隆抗体Herceptin(赫赛汀)是第一个针对HER-2阳性转移性乳腺癌的治疗药物，也是第一个靶向治疗乳腺癌的生物药物。研究表明，Herceptin单用作为HER-2过度表达的转移性乳腺癌一线治疗药物，不仅安全有效，而且耐受性好。若与化疗药物联合应用，则能显著抑制癌细胞生长，延长存活期，改善患者的总体生存率。

但采用Herceptin治疗HER-2过度表达的乳腺癌也存在一些问题与局限性，Herceptin的心脏毒性问题一直未得到解决。Herceptin是在蛋白水平上发挥作用，并不能从根本上抑制HER-2基因的表达。RNA干涉(RNA interference，RNAi)是通过短的双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)诱导靶基因发生转录后基因沉默(post-transcriptional gene sileneing，PTGS)的现象，是一种快速、高效的靶基因失活技术。本发明提供了一种发夹状小分子干涉RNA(smallinterfering RNA，siRNA)，该siRNA能有效抑制肿瘤细胞中HER-2的表达，并能抑制HER-2阳性肿瘤的生长。

发明内容

本发明的目的是设计一种能够有效抑制肿瘤细胞中HER-2基因表达的发夹状小干涉RNA，利用该发夹状小干涉RNA或其基因实现对HER-2阳性肿瘤的治疗。

具体的说，本发明提供了一种发夹状siRNA，命名为siRNA 3P，其序列从5′端到3′端为：

GAGUCCCAACCAUGUCAAAUUCAAGAGAUUUGACAUGGUUGGGACUCUUUUU。

本发明还提供了一种能有效转录所述发夹状siRNA的DNA分子。

含有上述siRNA或DNA分子的药物组合物可用于制备治疗HER-2阳性肿瘤的药物。

例如，将人工合成的发夹siRNA 3P制成药学上合理的药物制剂，如脂质体，能有效抑制HER-2阳性肿瘤细胞中HER-2的表达；将其与其它肿瘤治疗药物，如化学治疗药物和基因治疗药物，制成药学上可接受的药物组合物，能有效抑制HER-2阳性肿瘤细胞中HER-2的表达，并能抑制肿瘤的生长。