[发明专利]FK基因及其编码蛋白和应用

说明书

技术领域

本发明涉及FK基因，该基因编码的FK蛋白，以及所述基因和蛋白在医学中的应用。所述蛋白可与其他蛋白相互作用并参与泛素介导的蛋白降解过程，从而影响肿瘤的发生与发展。

背景技术

某些蛋白在肿瘤的发生发展过程中起着重要的抑制或促进作用，研究该基因及其编码蛋白的功能和作用机制，可为肿瘤的治疗提供新的方法和视角。

发明内容

本发明发现了一种参与泛素介导的蛋白降解过程的FK蛋白，并克隆了编码该蛋白的FK基因，构建了含有该基因的表达载体和含有该表达载体的宿主细胞，并且发现该蛋白在肿瘤的发生发展中起重要作用，基于以上发现，完成了本发明。

FK又叫HGNC：29249，Fbx42，KIAA1332。定位于染色体1p36.23-p36.11。全长3011bp，表达蛋白约为80kD。ORF：2151bp。编码717个氨基酸。

同源序列分析

Pan   troglodytes LOC456474   类似于FBX042蛋白

Homo  sapiens     AK055598.1  与CELL POLARITY PROTEIN TEA1弱相似

Pongo pygmaeus    CR858005.1  cDNA DKFZp469K075

Homo  sapiens     AB037753.1  KIAA1332蛋白的mRNA

Homo  sapiens     BC047296.1  与RIKEN cDNA 6720460I06基因相似

根据生物信息学预测，这个蛋白质含有两个主要的结构域，第一个是从第46至第83个氨基酸的F-box结构域，第二个是从第231至第272个氨基酸的kelch重复序列结构域。

本发明将pcDNA3.1(-)-FK表达质粒转染到MCF-7细胞中，使FK基因在该细胞中表达，提取细胞总蛋白，Western Blot鉴定了FK蛋白的存在。

MTT法检测FK蛋白对乳腺癌细胞增殖的影响，结果表明，FK蛋白对乳腺癌细胞的增殖起抑制作用。

因此，根据本发明，提供了：

1、在肿瘤发生发展中起重要作用的蛋白FK蛋白，尤其是重组蛋白，该蛋白具有序列表中序列2所示的氨基酸序列，或者通过所述氨基酸序列中的一个或多个氨基酸的缺失，取代或增加而得到的氨基酸序列。

2、本发明提供了编码上述蛋白的FK基因，它是具有序列1所示的碱基序列的DNA或者与所述DNA在严格条件下杂交的DNA。

3、含有上述基因或者编码上述蛋白的基因的表达载体。

4、本发明提供了由上述表达载体转化的宿主细胞。

5、生产本发明的重组蛋白的方法，培养上述转化的宿主细胞，使转化细胞产生本发明的重组蛋白。

6、针对如以上项1所述的蛋白的抗体，它是使用所述重组蛋白作为免疫原而产生的特异性抗体。它可以是单克隆或多克隆抗体。

7、以上项1所述的蛋白或以上项2所述的基因在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。

8、含有以上项1所述的蛋白和药学可接受的载体的药物组合物。

9、本发明提供了一个引物对，用于进行PCR扩增，引物如下所示：

引物1：5’-TAT AGA ATT CGC CAC CAT GGA CTA CAA GGA CGA CGA TGA CAA GGG TAC CATGGC CAG CTC CTC AGA CAG-3’

引物2：5’-GCG CAA GCT TTT ATC TCT TTG CTC GTA CAA AGT ACA AGG CG-3’

附图说明

图1为FK蛋白在真核细胞MCF-7中的表达图(Western blot)。一抗为小鼠抗人Flag单克隆抗体，二抗为羊抗鼠辣根过氧化物酶(HRP)偶联的二抗。1为阴性对照，2为细胞裂解液。MCF-7细胞用带Flag标签的pcDNA3.1(-)-FK转染。蛋白水平用抗Flag抗体检测。1、2道分别表示阴性对照和MCF-7的细胞裂解产物。

图2为染色体基因定位。此基因定位于染色体1p36.23-p36.11，cDNA全长为3011bp，其中标示为基因在1号染色体的位置。

具体实施方式