[发明专利]一种与乳腺癌有关的p60基因,其编码的蛋白及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种与乳腺癌有关的p60基因，该基因编码的Q9H9 72-2蛋白，以及所述基因和蛋白在医学中的应用。所述蛋白参与乳腺癌的发生发展，为乳腺癌的理论研究及临床治疗提供线索和思路。

背景技术

某些蛋白可抑制或促进肿瘤细胞的生长和增殖，发现新的抑制或促进肿瘤生长和增殖的基因和编码的蛋白可为肿瘤的治疗提供新的方法和手段。

发明内容

本发明发现了一种参与乳腺癌发生发展过程的蛋白Q9H972-2，克隆了编码该蛋白的基因p60，构建了含有该基因的表达载体和含有该表达载体的宿主细胞，并且发现该蛋白可影响乳腺癌等肿瘤细胞的生长和增殖，基于以上发现，完成了本发明。

p60又名HGNC：20162，FLJ12154。定位于染色体14q11.2，cDNA全长2352bp，表达蛋白约60kD，ORF长为1617bp，编码539个氨基酸。

同源序列比对

种属            序列号        特征

Pongo pygmaeus  CR85760.1     cDNA DKFZp468C2110

Canis familiaris NM_537369.2  类似于蛋白C14或f93前体

Bos taurus       NM_583415.2  类似于蛋白C14或f93前体

Pan troglodytes  XM_522798.1    类似于蛋白C14或f93前体

Rattus           XM_573773.1    类似于RIKEN cDNA 4931414P19

norvegicus

本发明将pcDNA3.1(-)-p60表达质粒转染到MCF-7细胞中，使p60基因在该细胞中表达，提取细胞总蛋白，Western Blot鉴定了p60基因表达产物的存在。

MTT法检测p60基因表达产物对乳腺癌细胞增殖的影响，结果表明，p60基因表达产物对乳腺癌细胞的增殖起抑制作用。

因此，根据本发明，提供了：

1、可影响肿瘤细胞的生长和增殖的蛋白，尤其重组蛋白，该蛋白具有序列表中序列2所示的氨基酸序列，或者通过所述氨基酸序列中的一个或多个氨基酸的缺失，取代或增加而得到的氨基酸序列。

2、编码上述蛋白的基因，它是具有序列1所示的碱基序列的DNA或者其互补序列或与所述DNA在严格条件下杂交的DNA。

3、含有上述基因或者编码上述蛋白的基因的表达载体。

4、由上述表达载体转化的宿主细胞。

5、生产本发明的重组蛋白的方法，该方法包括培养上述转化的宿主细胞，使转化细胞产生本发明的重组蛋白。

6、针对如以上项1所述的蛋白的抗体，它是使用所述重组蛋白作为免疫原而产生的特异性抗体。它可以是单克隆或多克隆抗体。

7、以上项1所述的蛋白或以上项2所述的基因在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。

8、含有以上项1所述的蛋白和药学可接受的载体的药物组合物。

9、一种用于对进行PCR扩增的引物对，引物如下所示：

引物1：5’-TAT AGA ATT CGC CAC CAT GTC CTT CAG TGC CAC CAT-3’

引物2：5’-TAT AGC CAC CGA ATT CAT GTC CTT CAG TGC CAC CAT-3’

附图说明

图1为PCR后1％琼脂糖电泳结果。

图2为p60编码的蛋白在真核细胞MCF-7中的表达图(Westernblot)。一抗为小鼠抗人Flag单克隆抗体，二抗为本实验室保存的兔抗鼠辣根过氧化物酶(HRP)偶联的二抗。1为阴性对照，2为细胞裂解液。用带Flag标签的pcDNA3.1(-)-p60质粒转染MCF-7细胞。蛋白水平用抗Flag抗体检测。1、2道分别表示阴性对照和MCF-7的细胞溶解产物。

图3为基因的染色体定位，定位于染色体14q11.2。

具体实施方式

本发明的一个方面是可抑制乳腺癌细胞增殖的蛋白Q9H972-2，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示。本发明的蛋白可以是重组蛋白、天然蛋白、合成蛋白等，优选是重组蛋白。本发明的蛋白可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。本发明的蛋白可以是糖基化或可以是非糖基化。