[发明专利]检测自身免疫疾病相关抗体谱的微阵列－酶联免疫检测试剂盒

说明书

发明领域

本发明涉及一种抗可提取性核抗原(ENA)抗体谱微阵列(Array)-酶联免疫(ELISA)检测试剂盒，特别是用于检测选自系统性红斑狼疮(SLE)，混合性结缔组织病(MCTD)、干燥综合症(SS)、系统性硬皮病(PSS)、多发性肌炎或皮肌炎(PM/DM)、和类风湿性关节炎(RA)的系统性自身免疫疾病之特征性抗体的ENA抗体谱微阵列-酶联免疫检测试剂盒。

发明背景

系统性自身免疫性疾病指风湿病中属于弥漫性结缔组织的一类疾病，主要包括系统性红斑狼疮(SLE)、混合性结缔组织病(MCTD)、干燥综合症(SS)、系统性硬皮病(PSS)、多发性肌炎或皮肌炎(PM/DM)和类风湿性关节炎(RA)等。

根据目前病理学和临床医学的发展水平，上述系统性自身免疫性疾病普遍存在着发病原因不明、病情严重、诊断困难等共同特征，迫切需要提供有效的诊断方法，以便及时治疗。

已知自身抗体是系统性自身免疫性疾病的重要标志。每种系统性自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱。病人血液中存在高效价自身抗体是系统性自身免疫性疾病的特点之一，也是临床确诊系统性自身免疫性疾病的重要标志之一。自身抗体检测在诊断系统性自身免疫性疾病、判断疾病的活动程度、观察治疗效果、指导临床用药及预后评估等具有重要的临床意义。随着对自身抗体的了解越来越深入，临床应用越来越广泛，免疫学技术进一步提高，自身抗体检测已是临床免疫检测的一项重要的实验室指标。

目前临床上常用的对获自患者的样品进行自身抗体的检测的方法主要包括：自身抗体检测方法有免疫双扩散法(DoubleImmunodifusion Assay，DID)、间接免疫荧光法(IndirectImmunoFluorescence Assay，IIF)、免疫印迹法(Western Blot，WB)和酶联免疫吸附法(Enzyme Linked ImmunoSorbant Assay，ELISA)等。

免疫双扩散法(DID)是经典的实验方法。其不用很多的特殊仪器，价格低廉，特异性高。但其操作费时费力，需要用肉眼来观察沉淀环，结果灵敏度低，判断不客观，对实验室技术人员的技术水平和经验要求较高，不同操作人员甚至是同一操作人员不同次操作结果的一致性较差。

间接免疫荧光分析法(IIF)是检测自身抗体的常用技术。其实验基质为HEp-2细胞或不同灵长类肝脏组织冰冻切片，含有完整的抗原谱。许多组织经IIF着染可提示自身抗体的存在，但是不能对自身抗体的种类进行具体客观的评价，因此其特异性的证实需要其它技术如免疫印迹法、ELISA等进行二级确认试验。并且对IIF着染的鉴定有一定的主观性，因而对结果的解释可能在不同工作日之间、不同观察者之间、新老组织切片之间而有所不同，对实验室技术人员的技术水平和经验要求较高，同时对实验室的专用设备荧光显微镜也有较高要求，各实验室在这些要求上很难达到统一，并且它使得各实验室之间的结果一致性较差。

免疫印迹法(WB)是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种免疫生化技术，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性的优点。但是在SDS-PAGE的过程中，许多抗原决定簇的构象可能遭到破坏，不能与特异性抗体发生反应或者发生非特异结合，造成结果判断错误。最近欧蒙(德国)医学实验诊断股份公司的一项研究发现仅可用天然的SSA检测抗SSA抗体。另外患者的样品中往往含有多种抗可提取性核抗原的抗体，能同时与ENA试剂反应出现多条沉淀线，肉眼观察结果不客观。

酶联免疫吸附法(ELISA)具有成熟度高，灵敏度高、特异性较好，操作方法简便快速、无放射性污染且检测结果排除了人为的主观判断，以及应用范围广等很多优点，但一次试验只能检测单一指标，通量低，检测成本较高，在自身免疫疾病的诊断应用推广方面存在着极大的局限性。

此外，免疫诊断蛋白芯片尽管能同时检测多项指标，但由于它是把抗原包被在用于制备蛋白质芯片的基底-玻片或膜上，并且玻片在点样前要经过醛基化或多聚赖氨酸等预处理，导致生产成本增加，以及后续实验的操作繁琐，重复性差，市场推广性不强。

为了克服上述检测系统性自身免疫疾病的现有方法中的缺点，节省时间和人力和物力，本发明人开发了一种工艺简单，定位准确，反应快速，价格低廉，能进行多项蛋白检测的ENA抗体谱微阵列-酶联免疫检测试剂盒，及其制备方法。

利用ENA抗体谱微阵列-酶联免疫检测试剂盒检测系统性自身免疫性疾病，成功克服了现有检测试剂盒操作繁琐、检测指标单一、检测成本高等缺陷，具有廉价、简单、快速、准确、多重检测等优点。

发明内容