[发明专利]检测冠状动脉粥样硬化性心脏病易感因子的方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及对可能发展为冠状动脉粥样硬化性心脏病的个体进行早期鉴定的方法。具体涉及检测冠状动脉粥样硬化性心脏病易感因子的方法及其检测试剂盒。

背景技术

冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary artery disease，CAD)是发达国家中的主要健康杀手[1～4]。2003年Wang等人通过对美国一白种人冠状动脉粥样硬化性心脏病家系的研究，在肌细胞增强因子2A(myocyte enhancerfactor 2A，MEF2A)编码基因第11号外显子区发现了21bp(Δ7aa)缺失的特异性突变，这一家系中所有冠状动脉粥样硬化性心脏病患者都存在这一特异的突变[5]，因此，MEF2A被认为是第一个被发现的冠状动脉粥样硬化性心脏病致病基因。随后，该研究小组通过对207例随机挑选的非家族遗传性CAD患者进行MEF2A基因的全基因组扫描，发现4例患者MEF2A基因的第7号外显子上存在3种错义突变(N263S，P279L，G283D)与其研究人群的CAD发病相关[6、7]，西班牙学者的研究也支持这一观点[8]。

但是，随后美国、日本等国学者通过对各自种族人群中MEF2A基因的研究却提出了相反的观点[9～11]。Weng等人通过对近300名白人冠心病病人进行的研究，未在CAD阳性组发现21bp(Δ7aa)缺失的特异性突变，却在健康对照人群中发现了1例携带该特异性突变，据此他们认为MEF2A基因的变异不是导致白种人CAD发生的主要原因[9]。

另外，Weng等人还对MEF2A编码基因第11号外显子区的CAG三联核苷酸重复序列的多态性与CAD间的关系进行了研究[9]。他们通过对数百例CAD阳性与阴性对照人群的研究，发现CAG重复单元的数目在两组样本中的分布没有差异。

由于各研究小组对MEF2A基因是否是冠心病发生的重要原因得出了不同的结论，使得该基因与CAD的相关性研究成为了目前该领域的热点问题之一。

在我国，人们的物质生活水平大幅度提高，但是由于饮食结构不够合理，又缺乏适当的锻炼，以及工作压力的不断增加，冠心病的发病率也在逐年增加，并呈现出低龄化的趋势。然而，MEF2A基因与我国国民患冠状动脉粥样硬化性冠心病间究竟存在怎样的联系至今还未见报道。因此有必要开展这方面的研究，为预测、预防和监控冠状动脉粥样硬化性冠心病寻求新的解决方案。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于在早期，即还未表现或还未明显表现出冠状动脉粥样硬化性心脏病症状时，检测某个体是否存在较高的发展为冠状动脉粥样硬化性心脏病的风险的方法。

本发明的另一个目的是提供一种用于检测冠状动脉粥样硬化性心脏病易感因子的检测试剂盒。

为实现第一目的，本发明提供一种确定被测者有发展为冠状动脉粥样硬化性心脏病风险的方法，该方法包括：检测被测者肌细胞增强因子2A基因开放阅读框区第11号外显子中CAG三联核苷酸重复序列等位基因的CAG重复单元数；和判断该被测者是否携带有CAG重复单元数在9～11个范围之外的等位基因，如果是则表明该被测者有发展为冠状动脉粥样硬化性心脏病的风险。进一步的，判断该被测者是否携带有CAG重复单元数在4～8个范围内的等位基因，如果是则表明该被测者有发展为冠状动脉粥样硬化性心脏病的风险。

上述方法进一步包括从被测者的离体样品中提取DNA；以及对MEF2A基因开放阅读框区第11号外显子中包含CAG三联核苷酸重复序列的DNA序列进行PCR扩增的步骤。其中PCR扩增采用选自如下的引物对：

上游引物：5’-TGCAGAGGTACTTGCAAGCCAT-3’和下游引物：5’-AGATATGTAGGGCAGGTCACT-3’；或

上游引物：5’-TCAGTGCTGGAGGGCAGTTA-3’和下游引物：5’-CAATTGGAGAATGGAAGTCGC-3’。

为实现第二目的，本发明提供一种检测冠状动脉粥样硬化性心脏病易感因子的试剂盒，该试剂盒包括：

A、用于扩增肌细胞增强因子2A基因开放阅读框区第11号外显子中包含CAG三联核苷酸重复序列的DNA序列的引物对；

B、对照样本DNA，所述对照样本DNA包括4～15个CAG重复单元的序列分别与11个CAG重复单元的序列形成的12种基因型组合。

其中所述的引物对选自如下的组中：