[发明专利]β天花粉蛋白的快速纯化及其结晶技术无效
申请号: | 200610084960.6 | 申请日: | 2006-05-31 |
公开(公告)号: | CN101081862A | 公开(公告)日: | 2007-12-05 |
发明(设计)人: | 陈明晃 | 申请(专利权)人: | 中国科学院福建物质结构研究所 |
主分类号: | C07K14/415 | 分类号: | C07K14/415 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 350002福*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 天花粉 蛋白 快速 纯化 及其 结晶 技术 | ||
1.一种β天花粉蛋白的快速纯化的方法,将天花粉原生材料去皮洗净,切 碎,加5mM,pH4.5醋酸缓冲液抽提,匀浆,加50%冰醋酸调pH4.0,然后在4 ℃条件下,16000×g离心30min,上清液加样到20mM,pH4.5醋酸缓冲液平衡 的强阳离子交换树脂S-Sepharose Fast Flow或SP-Sepharose Fast Flow的柱上, 柱长要求在20cm以上,280nm实时检测,用20mM,pH4.5醋酸缓冲液洗至基 线,再用20mM,pH6.5磷酸缓冲液洗至基线,然后用15-20倍柱床体积缓冲液 0-0.3M NaCl梯度洗脱,一般会出3个峰;收集第2峰,用50%冰醋酸调pH4.0, 加两倍体积的醋酸缓冲液,上样到已用相同醋酸缓冲液平衡的强阳离子交换树 脂Sp-Sepharose Fast Flow的柱上,用pH4.5,20mM醋酸缓冲液洗柱,再用pH7.5, 10mM磷酸缓冲液洗至基线,然后用0-0.4M NaCl梯度洗脱,即可获得β天花 粉蛋白,其特征在于:在缓冲液抽提后,经过2步强阳离子交换柱梯度洗脱, 就可以得到β天花粉蛋白。
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