[发明专利]一种含有转铁蛋白和槲皮素的结合物的混合溶液及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种含有转铁蛋白和槲皮素的结合物的混合溶液，具体地说是涉及一种生物大分子转铁蛋白(Tf)和药物小分子槲皮素相互作用，槲皮素调控转铁蛋白的构象变化产生的结合物，及其在制备治疗结肠腺癌细胞(LoVo)的药物中的用途。 

背景技术

药物小分子槲皮素(3，5，7，3′，4′-pentahydroxyflavone)是一种广泛分布的黄酮类化合物，其结构式如式I所示，其为两个苯环(式I中的A和B环)通过一含氧的杂环连接(C环)而成。 

式I 

研究表明，在食物中，大多槲皮素都有抗氧化以及和金属离子鳌合的能力，同时也具有很多生物及生物化学的功效，如抗炎，抗肿瘤等活性。但是，由于其具有抗药性，限制了槲皮素在作为治疗肿瘤药物中的广泛应用。 

在治疗疾病的过程中，为了提高药物疗效，降低其不良反应和减少药源性疾病，通常采用将药物定向浓集于靶器官、靶组织、靶细胞的靶向给药系统。其中，生物大分子转铁蛋白(Tf)是由肝脏合成的一种单链糖蛋白，转铁蛋白和转铁蛋白受体(TfR)介导的内吞作用是生物细胞最具特点的转运过程之一。在文献1：Trends pharmacol Sci.2002，23(5)：206中的研究表明，利用Tf-TfR的转运途径，将治疗药物特异性地转运至肿瘤部位是可行的。除了铁之外，许多治疗性与诊断性金属离子也可结合转铁蛋白的铁结合位点，形成复合物，DNA与转铁蛋白偶联转染靶细胞，可将外源性的DNA引入细胞，是一种非病毒载体基因治疗途径。然而，现有对药物靶向研究主要集中于 通过偶联物使药物分子和转铁蛋白偶联，转铁蛋白作为介导系统运送至肿瘤细胞，这样不仅偶联过程涉及很多环节，而且偶联物在治疗肿瘤中也会对细胞有毒性作用。 

发明内容

本发明的目的在于克服单独使用槲皮素，具有抗药性，限制了其应用，而使用转铁蛋白作为介导系统可以提高对肿瘤细胞的靶向作用，从而提供一种利用生物大分子转铁蛋白(Tf)将治疗性药物小分子槲皮素特异转运至肿瘤细胞，可以提高槲皮素对肿瘤细胞的靶向作用的且安全的含有转铁蛋白和槲皮素的结合物的混合溶液。 

本发明的另一目的在于提供上述含有转铁蛋白和槲皮素的结合物的混合溶液在制备治疗结肠腺癌细胞(LoVo)的药物中的用途。 

本发明的目的是通过如下的技术方案实现的： 

本发明提供的含有转铁蛋白和槲皮素的结合物的混合溶液，是通过如下的方法得到的： 

1)将槲皮素溶于pH 6.8～7.8的磷酸缓冲溶液中，配成10×10^-4M的溶液； 

2)将转铁蛋白溶于pH 6.8～7.8磷酸缓冲溶液中，配成1.25×10^-4M的溶液； 

3)将步骤1)和2)得到的相同pH的溶液混合，混合液中的转铁蛋白与槲皮素的摩尔浓度比为1∶4；再用磷酸缓冲溶液稀释到混合液中槲皮素的浓度为40μM；将混合溶液摇匀后，静置9～15小时，转铁蛋白与槲皮素反应，得到含有转铁蛋白和槲皮素的结合物的混合溶液。 

经紫外可见吸收光谱、荧光光谱以及圆二色谱分析，在中性条件(pH 6.8～7.8)下，槲皮素通过氢键和具有介导作用的转铁蛋白结合，形成本发明提供的含有转铁蛋白和槲皮素的结合物的混合溶液，其中的槲皮素和人转铁蛋白相互作用，并且槲皮素可以调控转铁蛋白的构象。当处于酸性环境(pH 5.5～4.5)时，结合物中的槲皮素从转铁蛋白解离，同时转铁蛋白恢复开放状态，达到在胞吞体内酸化释放的目的。 

选用LoVo细胞为实验细胞，以MTT法测定转铁蛋白和槲皮素的结合物的混合溶液对上述细胞的杀伤作用。结果表明：本发明提供的含有转铁蛋白和槲皮素的结合物的混合溶液通过将槲皮素和转铁蛋白结合，同时，在适宜pH值的磷酸缓冲溶液中，槲皮素可以诱导转铁蛋白构象发生变化，提高了槲皮素对肿瘤的细胞毒作用，达到了通过转铁蛋白，药物小分子对肿瘤细胞的靶向作用。 

当单独使用浓度为100μM槲皮素溶液时，对LoVo的细胞杀伤率仅有3％，但是使用含有相同浓度转铁蛋白和槲皮素的结合物的本发明提供的含有转铁蛋白和槲皮素的结合物的混合溶液对LoVo细胞的杀伤率提高到了17％。本发明提供的含有转铁蛋白和槲皮素的结合物的混合溶液可以用于制备治疗结肠腺癌细胞(LoVo)的药物。 

与现有技术相比，本发明提供的含有转铁蛋白和槲皮素的结合物的混合溶液的优点在于：