[发明专利]一种融合蛋白PEG-rSAK新型溶栓药物及其制备方法无效
| 申请号： | 200610089452.7 | 申请日： | 2006-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN101096660A | 公开（公告）日： | 2008-01-02 |
| 发明（设计）人： | 李国明;张春玲;梁伟;饶子和 | 申请（专利权）人： | 中国科学院生物物理研究所 |
| 主分类号： | C12N9/00 | 分类号： | C12N9/00;C12N9/50;C12N15/58;C12N15/62;C07K19/00 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 | 代理人： | 王旭 |
| 地址： | 100101北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 融合 蛋白 peg rsak 新型 药物 及其 制备 方法 | ||
1、一种新型重组葡激酶，其特征在于：改变野生型Sak二聚体结合面，即疏水性氨基酸，然后构建重组表达质粒，制备新型葡激酶分子。
2、按权利要求1所述的新型重组葡激酶，其特征在于所述新型葡激酶分子的蛋白质结构为：将36，66，75，83，85，91，100，102，109，110，131，136位氨基酸顺序替换为丙氨酸，甘氨酸，精氨酸，丙氨酸，丙氨酸，丙氨酸，天门冬氨酸，丝氨酸，丙氨酸，丙氨酸，色氨酸，精氨酸。
3、按权利要求1所述的新型重组葡激酶，其特征在于采用人源化嵌合抗体技术构建融合蛋白，在抗血小板凝集部位增加外源的抗血栓小肽(水蛭素)以增加其抗血栓的活性，在C端加入一段血浆纤维蛋白溶酶原的激活因子(t-PA)的K2结构域。
4、根据权利要求1所述的重组葡激酶，其特征在于从Staphylococcusaureus提取总DNA，SAK基因通过PCR进行扩增，引物序列如下：SAK-A(5′GAATT CAGGAGGCCT CATATGTCAAGTTCATTCGA-3′)
EcoRI
SAK-B(5′AAG TTCATTCATT CAGCATGCTG-3′).HindIII。
5、根据权利要求1～3所述的重组葡激酶，其特征在于t-PA K2的引物序列如下：
F：5-ATGAAGAGAGGGCTCTGCTGTGTG-3
R：5-GCTTGGCAAAGATGGCAGCCTGCC-3。
6、根据权利要求5所述的t-PA K2的cDNA再次PCR的引物序列如下：
F：5-AACAGTGACTGCTACTTTGGG-3
R：5-GCGAAACTGAGGCTGGCTGTACTG-3。
7、根据权利要求1～3所述的重组葡激酶，其特征在于水蛭素的引物序列如下：
F：5-GCAATCTGCGTGTCTCAAG-3
R：5-TCATTGTAAATATTCTTCTGG-3。
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